b050212

8/14/2019 b050212

1/7

B i o S M A R T ISSN: 1411-321XVolume 5, Nomor 2 Oktober 2003

Halaman: 124-130

2003 Jurusan Biologi FMIPA UNS Surakarta

Efek Pemberian Natrium Siklamat secara Oral terhadap Karakteristik

Hematologis Tikus Putih (Rattus norvegicus L.)

The effects of giving natrium cyclamate orally on rats (Rattus norvegicus L.) hematological

characteristics

RIANDINI AISYAH, SHANTI LISTYAWATI, TETRI WIDIYANIJurusan Biologi FMIPA Universitas Sebelas Maret Surakarta 57126

Diterima: 17 Mei 2003. Disetujui: 31 Agustus 2003.

ABSTRACT

The aims of this research were to study the effects of giving natrium cyclamate orally on rats (Rattus norvegicusL.) hematocryte value,Hb, erythrocyte and leukocyte number, Mean Corpuscular Volume (MCV), Mean Corpuscular Hemoglobin (MCH), Mean Corpuscular

Hemoglobin Concentration (MCHC), and the erythrocyte and leukocyte morphology. For these purposes, natrium cyclamate was treated

orally to rats ( Rattus norvegicusL.) within 30 days. The framework of this research is that natrium cyclamate, which is given orally torats, will enter the digestorial tract, goes into the circulatorial system and influences hematological characteristics. In this research,Complete Random Design with 5 experimental categories i.e.: 2 ml akuades/200 g body weight as the control, 4,5 mg natrium

cyclamate/200 g body weight; 9,5 mg natrium cyclamate/200 g body weight; 14,5 mg natrium cyclamate/200 g body weight and 19,5

mg natrium cyclamate/200 g body weight was used in this experiment. The observations included in the hematocryte value, Hb,

erythrocyte and leukocyte number, MCV, MCH and MCHC. The data resulted were analyzed by Analysis of Variance and DMRT.Morphology of erythrocyte and leukocyte was analyzed qualitatively. The result showed that the treatment of natrium cyclamate in 19,5

mg/200 body weights dosage decreased hematocryte value; 4,5 mg natrium cyclamate/200 body weight, 9,5 mg natrium cyclamate/200

body weight and 14,5 mg natrium cyclamate/200 body weights dosages decreased Hb; 9,5 mg natrium cyclamate/200 g body weight

14,5 mg natrium cyclamate/200 body weight and 19,5 mg natrium cyclamate/200 body weight's dosages reduced erythrocyte numberand increased leukocyte number. It can be concluded that the treatment of various dosages of natrium cyclamate could change the

erythrocyte and leukocyte morphology.

Key words: natrium cyclamate, rat (Rattus noregicusL.), hematological characteristics.

PENDAHULUAN

Pemanis buatan adalah bahan tambahan makanan (BTM)yang berasa manis, tidak atau hampir tidak mempunyai

nilai gizi, dan tidak mengandung kalori. Penggunaan

pemanis buatan cenderung tinggi karena lemahnya

pengawasan serta adanya masyarakat yang belum atautidak tahu bahayanya, sehingga produsen mengambil

keuntungan dari kondisi ini. Pemanis buatan yang banyak

digunakan di Indonesia adalah siklamat dan sakarin.Siklamat berupa kristal atau bubuk kristal yang berwarna

putih, tidak berbau, mudah larut dalam air dan pada bentuk

larutan memiliki tingkat kemanisan sebanyak 30 kali rasamanis sukrosa (Murdiati dkk., 1988). Siklamat yang

biasanya dipakai adalah natrium siklamat (Sally, 1998;Murdiati dkk., 1988), namun senyawa ini dapat

menimbulkan kanker atau mutasi genetik pada manusia,

karena adanya sikloheksilamin (Lindsay, 1985). Siklamat juga memicu terbentuknya radikal bebas peroksida, suatu

katalisator kuat reaksi oksidasi lebih lanjut (Tranggono,

1988). Di Indonesia penggunaan siklamat masih diijinkan,

namun telah dibatasi dalam SK Menteri Kesehatan RI No.235 tahun 1979 dan SK Menteri Kesehatan RI No. 208

tahun 1985 (Murdiati dkk., 1988; Sally, 1996).

Penggunaan siklamat yang dianggap aman untukmanusia (acceptable daily intake; ADI) menurut ketentuan

FAO/WHO adalah 11 mg/kg berat badan/hari (0,2 mg/kg bb/hari untuk tikus putih), sedangkan batas maksimal

penggunaan (BMP) berdasarkan SK Menteri Kesehatan RI

No. 208 tahun 1985 untuk manusia adalah 3 g/kg bb/hari

(54 mg/kg bb/hari untuk tikus putih) (Murdiati dkk., 1988).Penelitian terdahulu menunjukkan bahwa siklamat

dapat menyebabkan terjadinya anemia yang ditandai

dengan menurunnya kadar hemoglobin (Hb) serta rusaknyasel-sel darah merah. Hal ini merupakan akibat penimbunan

sel darah putih (leukosit) secara abnormal (Hoffbrand dan

Pettit, 1987), dimana jumlah leukosit dapat mencapai lebihdari 10x10

4tiap mm

3(Mattingly dan Seward, 1993).

Penelitian tentang unsur darah penting untuk kesehatankarena morfologi, jumlah dan perbandingan berbagai

macam jenis sel darah merupakan indikator dari berbagai

perubahan patologis dalam tubuh (Leeson dkk., 1996).Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui karakteristik

hematologis tikus putih ( Rattus norvegicus L.) yang

diperlakukan dengan natrium siklamat secara oral selama

30 hari, meliputi: nilai hematokrit (PCV), kadarhemoglobin, jumlah eritrosit, jumlah leukosit, MCV, MCH

dan MCHC, serta morfologi eritrosit dan leukosit.

8/14/2019 b050212

2/7

AISYAH, dkk. Efek Na-siklamat terhadap darah Rattus norvegicus 125

BAHAN DAN METODE

Waktu dan tempat penelitian

Percobaan ini dilaksanakan pada bulan September-

Oktober 2002. Pemeliharaan hewan uji dan pemberian perlakuan dilaksanakan di Unit Pengembangan Hewan

Percobaan (UPHP) UGM Yogyakarta. Pembuatan preparatapus untuk pemeriksaan morfologi darah, pengukuran nilaihematokrit (PCV), kadar Hb, perhitungan jumlah eritrosit

dan leukosit, MCV, MCH dan MCHC dilakukan di

Laboratorium Pusat MIPA UNS Surakarta.

Alat dan bahan

Alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi:

kandang pemeliharaan tikus putih, spuit 3 ml dan kanul,tempat air minum, sentrifus , sealing putty, mikrohema-

tokrit, spektrofotometer UV-1601 merk Shimadzu, tabung

reaksi, kuvet, mikropipet, pipet volume, hemasitometer tipedouble improve neubauer, mikroskop, pipet pengencer

eritrosit, pipet pengencer leukosit, mikroskop, gelas benda,

pipet tetes, kertas tissue, dan alat fotomikrografi.Bahan yang digunakan meliputi tikus putih (Rattus

norvegicus L.) jantan umur 2,5 bulan dengan berat badanrata-rata 200 gram, Par G pellet sebagai pakan sehari-hari,

air ledeng, natrium siklamat, EDTA, larutan Hayem,

larutan Turk, metanol, zat warna Giemsa dan air mengalir.

Cara kerja

Rancangan percobaanPercobaan ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap

(RAL) dengan 5 macam perlakuan, setiap perlakuan

dengan 5 ulangan. Tikus putih berumur 2,5 bulan dengan

berat badan rata-rata 200 gram dipelihara di kandang,

masing-masing kandang perlakuan berisi 5 ekor tikus putih

(total 5 perlakuan = 25 ekor). Sebelum dipergunakan tikusputih diaklimatisasi 1 minggu. Tikus uji diberi pakan dan

minum secara et libitum serta diberi larutan natrium

siklamat secara oral selama 30 hari, dengan dosis per hariuntuk masing-masing kelompok sebagai berikut:

I : 2 ml akuades (sebagai kontrol)/200 g bb

II : 4,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bbIII: 9,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb

IV: 14,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb

V : 19,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb

Teknik pengambilan data

Pengambilan sampel darah. Darah diambil dari sinusorbitalis tikus putih menggunakan mikrohematokrit (Smithdan Mangkoewidjojo, 1988). Pengambilan darah dilakukan

10 hari sekali sebanyak 1 ml.Pengukuran kadar hematokrit dan hemoglobin.

Kadar hematokrit ( packed cell volume; PCV) diukur

dengan tabung mikrohematokrit yang sudah dilapisiantikoagulan EDTA. Darah dihisap dari sinus orbitalis

dengan pipa hematokrit, hingga bagian pipa, kemudian

dipusingkan dengan kecepatan 1500 rpm selama 5 menit.Pengukuran dilakukan dengan membandingkan bagian

darah yang mengendap dengan seluruh bagian darah yang

ada dalam tabung mikrohematokrit (Benyamin, 1961).Adapun kadar hemoglobin diukur dengan metode

sianmethemoglobin. Dalam hal ini eritrosit dihancurkan

agar hemoglobin lepas dan dapat diubah menjadi bentukyang stabil dengan larutan Drabkin, sehingga semua

hemoglobin, oksihemoglobin, methemoglobin, dan

karboksilhemoglobin menjadi sianmethemoglobin. Kadar

hemoglobin ditentukan dengan spektrofotometer, dimana 5ml larutan Drabkin dimasukkan dalam tabung reaksi,

ditambah 0,02 ml darah, dicampur, dan dibiarkan 3 menit,lalu dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 540 nmKadar Hb dapat diketahui dengan menggunakan kurva

kalibrasi atau langsung dihitung dengan konsentrasi Hb =

absorbansi x nilai yang tertera di kalibrasi larutan Drabkin

(Tahono dkk., 2000).Perhitungan jumlah eritrosit. Perhitungan eritrosit

dilakukan dengan hemasitometer. Darah dihisap ke dalam

pipet pengencer eritrosit sampai tanda 0,5 dan larutanHayem sampai tanda 101. Jumlah eritrosit per mm

3darah =

jumlah eritrosit terhitung x 10.000 (Gandasoebrata, 1992).

Perhitungan jumlah leukosit. Perhitungan dilakukan

dengan cara mengencerkan darah dengan menggunakan

larutan Turk. Darah dihisap ke dalam pipet pengencer

leukosit sampai tanda 0,5 dan larutan Turk sampai tanda11. Perhitungan leukosit dilakukan dengan menggunakan

hemasitometer. Jumlah leukosit per mm3

darah = jumlahleukosit terhitung x 50 (Gandasoebrata, 1992).

Perhitungan nilai MCV,MCH, danMCHC.

Mean Corpuscular Volume (MCV) adalah perbandingan hematokrit dengan jumlah eritrosit atau

volume rata-rata eritrosit dari sampel darah.

MCV =

)(juta/mmeritrositJumlah

PCVx10

3fl

fl = femtoliter =1015

liter

Mean Corpuscular Hemoglobin (MCH) adalah jumlahrata-rata hemoglobin dalam eritrosit.

MCH = pg)(juta/mmeritrositJumlah

10x(Hb)Hemoglobin3

pg = picogram =10-12

gram

Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration(MCHC) adalah jumlah hemoglobin per unit eritrosit.

MCHC = %PCV

100x(Hb)Hemoglobin

Morfologi sel darah. Pengamatan morfologi sel darah

dilakukan dengan pembuatan preparat apus darah (smear

preparation). Sediaan apus darah difiksasi dengan metanolselama 5 menit, kemudian dikeringanginkan selanjutnya

direndam dalam larutan pewarna Giemsa 3% dalammetanol selama 20 menit, dicuci dan dikeringkan.

Pengamatan eritrosit dan leukosit dilakukan dengan

membandingkan sel-sel yang terdapat pada sediaan apus.

Analisis dataData dianalisis dengan Analisis Varian (Anava) untuk

mengetahui pengaruh natrium siklamat terhadap nilai

hematokrit (PCV), kadar Hb, jumlah eritrosit, nilai MCV,MCH, MCHC, dan jumlah leukosit tikus putih, kemudian

dilanjutkan dengan uji DMRT pada taraf signifikansi 5%.

Morfologi eritrosit dan leukosit dianalisis secara kualitatif.

8/14/2019 b050212

3/7

B i o S M A R T Vol. 5, No. 2, Oktober 2003, hal. 124-130126

HASIL DAN PEMBAHASAN

Bahan kimia dinyatakan toksik apabila memiliki efek

berbahaya bagi makhluk hidup (Koeman, 1987). Sifat

toksik zat kimia dapat teramati dari adanya perubahanfungsional, struktural, atau biokimiawi. Faktor penting

yang mempengaruhi potensi aman atau tidaknya suatu zatkimia adalah hubungan antara dosis (kadar zat) denganefek yang ditimbulkannya (Loomis, 1978).

Perubahan hematologis

Nilai hematokrit (PCV)Hematokrit adalah perbandingan sel-sel darah merah

dalam suatu volume darah tertentu. Hematokrit menunjuk-

kan persentase eritrosit dalam darah (Wulangi, 1993).

Tabel 1. Rata-rata nilai hematokrit pada tikus putih setelahpemberian natrium siklamat dengan dosis yang bervariasi.

Nilai hematokrit (%)Kel.

10 hari ke-1 10 hari ke-2 10 hari ke-3

I 45,600,67 Ba 45,800,47 Ba 45,400,84 Ca

II 44,800,50 bb 43,400,27 Aab 42,800,42 Ba

III 44,400,44 Ba 43,400,57 Aa 43,400,67 Ba

IV 44,200,55 Ba 44,400,44 ABa 43,800,65 Ba

V 42,600,91 Ab 43,000,61 Ab 41,001,06 Aa

Dalam penelitian ini, secara keseluruhan terjadi

penurunan nilai hematokrit pada akhir perlakuan (Tabel 1.)

Pada pemberian natrium siklamat dengan dosis paling

tinggi yakni 19,5 mg/200 g bb terjadi penurunan nilai

hematokrit secara nyata, hal ini menunjukkan adanyakecenderungan tikus untuk mengalami anemia yang

ditandai dengan menurunnya konsentrasi sel-sel darah

merah. Menurut Benjamin (1961), nilai hematokrit

merupakan cara sederhana untuk mengetahui abnormalitaspada darah. Nilai ini umumnya dianggap sama manfaatnya

dengan jumlah sel darah merah total. Dari hasil uji Anava,

terlihat bahwa pengaruh natrium siklamat yang palingsignifikan adalah faktor dosis dan waktu (F hitung>0,05),

sedangkan untuk faktor interaksi antara dosis dan waktutidak berpengaruh nyata (F hitung0,05), sedangkanfaktor dosis maupun interaksi antara dosis dan waktu tidaksignifikan (F hitung0,05), sedangkan

faktor interaksi antara dosis dan waktu tidak berpengaruh

nyata (F hitung

8/14/2019 b050212

4/7

AISYAH, dkk. Efek Na-siklamat terhadap darah Rattus norvegicus 127

Hb yang ada pada eritrosit belum mencapai kadar optimal.Jumlah Hb yang belum stabil ini menyebabkan

kemampuan Hb untuk mengikat oksigen belum optimal.

Menurut Wulangi (1993), jumlah oksigen yang menurun

akan mengakibatkan hati melepaskan lebih banyak globulindan ginjal memproduksi lebih banyak fak-tor eritropoietik

ginjal. Di dalam darah, globulin dan faktor eritropoietikginjal akan mengadakan interaksi membentuk eritropoietikyang akan merangsang terjadinya eritropoiesis.

Kecepatan eritropoiesis diatur sedemikian rupa sehing-

ga jumlah eritrosit yang terdapat dalam peredaran darah

kurang lebih konstan. Setiap kali jumlah oksigen yangditransport ke jaringan berkurang biasanya akan mening-

katkan kecepatan pembentukan eritrosit. Pada 10 hari ke-3,

dosis 14,5 mg/200 g bb dan 19,5 mg/200 g bb tikuscenderung mengalami anemia karena jumlah eritrositnya di

bawah kisaran normal, hal ini diatasi dengan pembentukan

eritrosit oleh sumsum tulang. Oleh karena itu, bukan kon-

sentrasi yang mengatur kecepatan pembentukann eritrosit,

tetapi kemampuan fungsional sel untuk mentransport

oksigen ke jaringan (Philips dan Murray, 1995).Dari dua puluh tikus yang diberi perlakuan natrium

siklamat, 15 diantaranya menunjukkan jumlah eritrosityang lebih rendah dari jumlah normal (7,2-9,6x10

6/mm

3

darah). Tikus uji mempunyai jumlah eritrosit lebih rendah

dari pada tikus kontrol. Menurut Hanim (1997), natriumsiklamat dapat merusak sel-sel darah merah, sehingga

menurunkan jumlah eritrosit dalam sirkulasi dan cenderung

menyebabkan anemia.

Jumlah leukosit

Leukosit merupakan bagian penting dari pertahanan

tubuh terhadap invasi asing. Pada umumnya semua leukosit

melakukan fungsinya dalam jaringan, dan darah hanya

digunakan sebagai alat transport dari tempat pembentukan,penimbunan dan aktivitas (Burkitt dkk., 1995).

Tabel 4. Rata-rata jumlah leukosit pada tikus putih setelahpemberian natrium siklamat dengan dosis yang bervariasi.

Jumlah leukosit (10 3/mm3 darah)Kel.


I 12,800,40Aa

12,800,80Aa

12,160,33Aa

II 13,920,45Aa

12,801,20Aa

13,120,73Aa

III 15,041,18 Aa 14,400,68 Aa 23,041,07 bb

IV 26,401,62 Ba 28,000,56 Ba 27,362,06 Ca

V 28,802,06 Ba 28,800,49 Ba 34,082,42 Db

Setelah 30 hari diberi perlakuan, tikus uji mengalami

peningkatan jumlah leukosit terutama pada dosis 19,5mg/200g bb. Peningkatan jumlah leukosit ini sebagian

adalah leukosit-leukosit abnormal, meskipun belum terlihat

kecenderungan tikus untuk mengalami leukemia (jumlahleukosit lebih dari 10x10

4/mm

3darah), tidak menutup

kemungkinan hal ini dapat terjadi apabila pemberian

natrium siklamat dosis tinggi diberikan secara terus-

nenerus untuk jangka waktu yang panjang sehingga terjadi

akumulasi dan toksisitas bahan pemanis tersebut. Dari hasiluji Anava, terlihat bahwa faktor dosis, waktu, maupun

interaksi antara dosis dan waktu berpengaruh sangat

signifikan (F hitung>0,05) (Tabel 4.).

Nilai MCV, MCH, dan MCHC

Selain pemeriksaan kadar Hb dan jumlah eritrosit,

pemeriksaan anemia anemia sering pula dilengkapi dengan

pemeriksaan volume rata-rata eritrosit (MCV), jumlah rata-

rata Hb eritrosit (MCH) dan jumlah Hb per unit eritrosit(MCHC).

Tabel 5. Rata-rata nilai MCV pada tikus putih setelah pemberian

natrium siklamat dengan dosis yang bervariasi.

MCV (fl)Kel.


I 47,203,10 Aa 49,684,86 Aa 51,044,33 Aa

II 59,365,18Ba

55,985,47Aa

58,044,13Aa

III 49,342,00ABa

55,762,78Aab

65,787,57bb

IV 51,884,35ABa

58,683,47Aa

74,222,45bb

V 51,882,01 ABa 57,263,20 Aa 69,183,22 bb

Tabel 6. Rata-rata nilai MCH pada tikus putih setelah pemberiannatrium siklamat dengan dosis yang bervariasi.

MCH (picogram)Kel.


I 17,381,02 Ab 12,041,11 Aa 13,421,15 Aa

II 14,441,15 Aa 13,742,44 Aa 16,782,01 Aab

III 14,421,33 Aa 14,661,22 Aa 22,463,87 bb

IV 16,762,68 Aa 15,980,85 Aa 23,202,35 bb

V 16,121,56 Aa 15,440,83 Aa 22,402,49 bb

Tabel 7. Rata-rata nilai MCHC pada tikus putih setelahpemberian natrium siklamat dengan dosis yang bervariasi.

MCHC (%)Kel.


I 36,920,52 bb 23,840,61 Aa 27,023,07 BaII 29,722,00 Aa 24,523,24 Aa 29,183,56 Aa

III 29,403,02 Aa 26,501,89 Aa 29,502,53 Aa

IV 32,463,56 ABa 27,280,39 Aa 31,162,49 ABa

V 31,062,83 Aba 27,060,83 Aa 32,303,19 ABa

Keterangan Tabel 1-7: Angka yang diikuti huruf kapital yangsama dalam satu kolom menunjukkan tidak beda nyata antardosis perlakuan. Angka yang diikuti huruf kecil yang sama dalamsatu baris menunjukkan tidak beda nyata antar waktu.I : 2 ml akuades/200 g bb tikusII : 4,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb tikusIII : 9,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb tikusIV : 14,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb tikusV : 19,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb tikus

Data pada Tabel 1, 2, dan 3, menunjukkan bahwa nilai

MCV dan MCH mengalami sedikit peningkatan padakelompok perlakuan III (9,5 mg/200g bb), IV (14,5 m

g/200g bb) dan V (19,5 mg/200g bb), sedangkan nilai

MCHC stabil untuk semua kelompok perlakuan. Nilai

MCV menyatakan perbandingan hematokrit terhadapjumlah eritrosit (femtoliter), nilai MCH menyatakan jumlah

rata-rata Hb dalam eritrosit (picogram) dan nilai MCHC

menyatakan jumlah Hb per unit eritrosit (%). Belum adastandar yang pasti untuk nilai MCV, MCH dan MCHC

pada tikus putih yang menyatakan keadaan anemia.

8/14/2019 b050212

5/7


Dari hasil uji Anava, terlihat bahwa faktor yang berpengaruh signifikan terhadap nilai MCV dan MCH

adalah faktor dosis dan waktu (F hitung>0,05), sedangkan

faktor interaksi antara dosis dan waktu tidak berpengaruh

nyata (F hitung0,05) sedangkan

faktor dosis dan interaksi antara waktu dan dosis tidaksignifikan (F hitung

8/14/2019 b050212

6/7

8/14/2019 b050212

7/7


Hasil pengamatan terhadap morfologi eritrosit danleukosit tikus putih yang diberi perlakuan dengan natrium

siklamat menunjukkan terjadinya eritrosit bentuk paku

payung, bentuk topi dan terjadinya poikilositosis (bentuk

eritrosit yang bervariasi). Pada leukosit terjadi kerusakanlobus neutrofil dan kecenderungan terjadinya leukositosis

(jumlah leukosit yang terlalu banyak).

DAFTAR PUSTAKA

Benyamin, M.M. 1961. Outline of Veterinary Clinical Pathology. 3rd

edition. Ames-Iowa: The IOWA State University Press.Burkitt, H.G., B. Young, dan J.W. Heath. 1995. Histologi Fungsional.

Edisi 3. Penerjemah: Tambajong, J. Jakarta: EGC Penerbit BukuKedokteran.

Gandasoebrata, R. 1992. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: P.T

Dian Rakyat.

Hanim, D. 1997. Pengaruh Vitamin E terhadap Organ Hati dan Uterus

Yikus Putih (Rattus norvegicus) Betina yang Diberi Perlakuan

Natrium Sakarin dan Natrium Siklamat (Studi Awal: Endometriosis

pada Wanita Hamil). [Thesis]. Surakarta: Bagian Ilmu Gizi FakultasKedokteran UNS.

Hoffbrand, A.V dan J.E. Pettit. 1987. Kapita Selekta Haematologi. Edisi2. Penerjemah: Darmawan, I. Jakarta: EGC Penerbit Buku

Kedokteran.

Koeman, J.H.1987. Pengantar Umum Toksikologi. Penerjemah: Yudono,

R.H. Yogyakarta: UGM Press.

Leeson, T.S, C.R. Leeson, dan A.A. Paparo. 1996. Buku Ajar Histologi.Jakarta: EGC Penerbit Buku Kedoteran.

Lindsay, R.C. 1985. Food Chemistry. 2nd edition. Penyunting: Fennema,

O.R. New York: Marcell Dekker Inc.

Loomis, T.A. 1978. Toksikologi Dasar. edisi 3. Penerjemah: Donatus,I.A.. Semarang: IKIP Press.

Mattingly, D dan C. Seward. 1993. Bedside Diagnosis. edisi 13.Penerjemah: Hartono, A. Yogyakarta: UGM Press.

Murdiati, A., Supriyanto, dan P, Triwitono. 1988. Uji ToksisitasBahan Pemanis Buatan pada Tikus. Yogyakarta: Pusat Antar UniversitasPangan dan Gizi UGM.

Phillips, J. and P. Murray. 1995. The Biology of Desease. Oxford:

Bleckwell Science Ltd.

Sally, T.S. 1996. Pemanis buatan dalam makanan dan minuman. Majalah

IlmiahFakultas Kedokteran Usakti 15 (2): -Sally, T.S. 1998. Pemanis buatan dalam beberapa merek madu produksi

Indonesia. Majalah IlmiahFakultas Kedokteran Usakti 17 (2): -

Smith, J.B dan S. Mangkoewidjaja.1988. Pemeliharaan, Pembiakan dan

Penggunaan Hewan Percobaan di Daerah Tropis. Jakarta: UI Press.

Tahono, Hadiwidodo, Yuwono dan Wuryaningsih. 2000.Patologi Klinik I

Pengantar Analisa Laboratorium Patologi Klinik Fakultas

Kedokteran. Surakarta: UNS Press.

Tranggono. 1988. Kimia dan Biokimia Lipid, Kumpulan Hand Out

Magang dalam Negeri Kimia dan Biokimia Pangan. Yogyakarta:Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi UGM.

Wulangi, K.S. 1993.Prinsip-prinsip Fisiologi Hewan. Jakarta: Depdikbud

Dirjen Pendidikan Tinggi Proyek Pembinaan Tenaga Kependidikan.

b050212

Documents