carpeta de trabajos prácticos 2010

7/25/2019 Carpeta de Trabajos Prcticos 2010

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CARPETA

DETRABAJOS PRCTICOS

DEQUMICA BIOLGICA II

Profesor: Dr. Osvalo Le!" C!ro#aJ.T.P: B$o%. Mar&a A"rea A#alos

A'(. )ra: B$o%. M!"$*a Bea+r$, Be*erra


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REGLAMENTO DE QUIMICA BIOLOGICA II 2010

1- Puntualidad en el horario de los trabajos Prcticos2- Aprobacin del 85% de los Trabajos Prcticos (asistencia, aprobacin cuestionario y delinor!e"#

$-l parcialito se to!ara antes de cada TP& los desaprobados podrn recuperarse antes de cadaparcial#'- e to!aran $ e)!enes parciales *ue incluirn cada uno 5 unidades del pro+ra!a de laasi+natura#5- ada unidad se aprueba con el .%, pudiendo recuperarse hasta dos unidades- Al inal de la cursada se podr rendir un recuperatorio inal#- Co/o +ra#a0o f$"al los al'/"os e#er1" e(2o"er e" '" se/$"ar$o3 '" +ra#a0o e$"ves+$4a*$!"3 e"+re4ao 2or la *1+era.


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CRONOGRAMA QUIMICA BIOLOGICA II 2010

TEORIAS Mircoles 11-14 hs Al!" 101 # $e%es 10-1& hs Al!" 10&

TRABA$OS 'RACTICOS MARTES ()&0-1& h L!*or!+orio A

/artes $08 Presentacin Teora

/artes 1.08 Teora

/artes 1308 Teora

/artes 2'08 Teora

M!r+es &1, I 'ARCIAL

/artes 304 TP 1# Protenas

M!r+es 14,( SEMANA DEL ESTUDIANTE

$e%es 1. ,( RECU'ERATORIO I 'ARCIAL

/artes 2104 TP 2# Protenas

/artes 2804 TP $# Protenas

/artes 501. TP '# Protenas 6

/artes 1201. TP 5# nduccin

/artes 1401. TP # 7luc+eno cuantiicacin en tejidos

/artes 201. TP 3# Produccin de Piru9ato y Acetaldehdo durante la er!entacin de7lucosa#

/ieres 2(,10 II 'ARCIAL

/artes .2011 TP 8# :otosntesis

/ieres 12,11 RECU'ERATORIO II 'ARCIAL

M!r+es 1.,11 III 'ARCIAL

$e%es 1,11 SEMINARIO

$e%es 2,11 RECU'ERATORIO III 'ARCIAL

Les 2(,11 RECU'ERATORIO INAL


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;u!ica


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;u!ica !> 'URIICACION DE LA LISOIMA

1# Reco;er la clara procedente de un hue9o# Dilirl! 1, (9ol09ol" con B66er A# To!ar 1. !l de la!uestra anterior en un tubo cnico con tapn de 15 !l#2# Antes de co!en=ar la puriicacin de la liso=i!a separar ! !l


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;u!ica 2# AEadir 2 Ml de la raccin correspondiente a ensayar, to!ar el tie!po por el reloj, !;i+!r eintroducir la cubeta en el espectroot!etro y anotar la absorbancia obser9ada al pri!er !inuto y alse+undo !inuto# alcular la 9ariacin de absorbancia al pri!er !inuto (NA1,8i" y al se+undo(NA2,8i"# Hacer la !edia de las dos !edidas#

Ao+!r los resultados en la tabla si+uiente

CALCULOS"

1# Ac+i%i:!: de cada raccin

2# Re+eci= :e l! resi!

Acti9idad :. Acti9idad :1 O 1..

Acti9idad :.

$> :e Rec9er!ci="

Acti9idad :$ O 1..Acti9idad :.

GUARDAR TODAS LAS RACCIONES 'ARA USARLAS EN LAS 'RFIMAS'R3CTICAS-Lecurso biblio+rico Practicas de


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;u!ica


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;u!ica - EECTO DE LA TEM'ERATURA DE LA REDUCCIN DE LOS 'UENTESDISULURO SOBRE LA ACTI/IDAD DE LA LISOIMA

OB$ETI/O estudiar la contribucin de los el!ces :isl6ro y 9e+es :e hi:r=;eo a laconor!acin del centro acti9o de la liso=i!a y su eecto sobre la acti9idad de la en=i!a#

l DTT :i+io+rei+rolH es re:c+or :e 9e+e :isl6ro# Por tanto, su adicin en concentracinsuiciente, reducir los --- de la liso=i!a y producir ca!bios en la estructura terciaria de la

protena# stos ca!bios pueden aectar a la acti9idad en=i!tica de la liso=i!a#Por otra parte, los 9e+es :e hi:r=;eo ta!biCn estn i!plicados en el !anteni!iento de laestructura de las protenas# stos puentes de hidr+enos se pueden ro!per cil!ente por+r!+!8ie+o co c!lor# el !is!o !odo al caso anterior, la !odiicacin de la estructura de la

protena por rotura de los puentes de hidr+eno puede !odiicar la acti9idad del en=i!a#

'ROTOCOLO

l estudio se lle9a a cabo en la raccin & 9ri6ic!:! en la prctica anterior#1# Preparar ' tubos eppendor nu!erados del 1 al ' y pipetear las cantidades adecuadas se+Kn seindica en la tabla si+uiente

1.

Tubo Fraccin F3 DTT (0.5 M)* 50C/30min

1 200 l - -

2 200 l 20 l -

3 200 l - +

4 200 l 20 l +


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;u!ica Leer e es9ec+ro6o+=8e+ro !

0 8> Lle%!r ! cero co el *l!co>L! re!cci= es es+!*le 9or ! hor!

CALCULOS

Re9rese+!r los 9alores de absorbancia a 35. n! rente a los M+0!l de albK!ina#

E+r!9ol!r los 9alores correspondientes a las distintas racciones de la puriicacinpara el clculo de la concentracin de protenas en !+0!l# Tener en cuenta el 6!c+or :e:ilci= e!pleado#

1$


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TRABA$O 'RACTICO

INDUCCION ENIMATICA

OB$ETI/Oo!prender el !ecanis!o de induccin en=i!tica y su inhibicin#

INTRODUCCIN

Bas bacterias son or+anis!os 9erstiles y de respuesta rpida# Perciben los ni9eles de !uchos

!etabolitos y utili=an una a!plia 9ariedad de !ecanis!os de re+ulacin de sus patrones

!etablicos#

Ba acti9idad de !uchas en=i!as puede estar re+ulada, por control alostCrico, !odiicacionesco9alentes y por el control de la e)presin +Cnica, de tal !anera *ue una scherichia oli puede

contener 1. copias de una protena y 1..#... copias de otra, 9ariando incluso la 9elocidad de

sntesis en respuesta a est!ulos e)ternos (nutrientes, condiciones a!bientales"#

Al+unas en=i!as se encuentran en cantidades constantes, independiente!ente del !edio y del

estado !etablico de la cClula, son las e7i8!s cos+i++i%!s) otras se sinteti=an rpida!ente y en

!ayor cantidad co!o respuesta a la presencia de un sustrato, son las e7i8!s i:ci*les>

n el +eno!a encontra!os los +enes para sinteti=ar todas las en=i!as, pero la sntesis de Cstas esta

re+ulada, lo *ue est de acuerdo con el principio de econo!a celular#

Uacob y /onod estudiaron el !ecanis!o de re+ulacin en scherichia oli, y propusieron un

!ecanis!o de re+ulacin para e)plicar la induccin de en=i!as *ue incluye control a ni9el +enCtico,

proponiendo la e)istencia de un operon para la re+ulacin de la -+alactosidasa por la Bactosa# i

scherichia oli utili=a +lucosa co!o uente de carbono, no poseer !s de 10 copias de -

+alactosidasa, !ientras *ue en presencia de lactosa, se induce la e)presin de esta en=i!a hasta

obtener 9arios !iles de copias, transor!ando la lactosa en +alactosa y +lucosa *ue pueden entrar

por eje!plo al ciclo de @rebs#

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Uacob y /onod postularon

- la e)istencia de un represor especico *ue se une al FA, cerca del co!ien=o del +en de la -

+alactosidasa, *ue i!pide la accin de la LFA poli!erasa *ue sinteti=a el LFA !ensajero#

la lactosa es un inductor, *ue al unirse al represor no per!ite su unin al FA, de esta or!a

la LFA polimerasa puede sintetizar el RNA mensajero de la -galactosidasa.

n el laboratorio se estudiara el en!eno de induccin en=i!tica en scherichia oli utili=andoco!o indicador de la presencia de la en=i!a el o-nitroenil+alactsido ON'GH>

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ONPG (orto-nitrofenil---+alactopiransido" es un sustrato de la -galactosidasa ue! alser "idrolizado! produce un compuesto (ortonitrofenol# ue presenta un intensocolor amarillo. $l ONPG es mu% utilizado en los ensa%os in 9itrode -galactosidasa!en los ue se puede o&tener la concentracin de -galactosidasa en funcin de laintensidad del color a!arillo, !edida porabsorbanciaa unalon+itud de ondade '2.n!#

Ta!biCn se utili=ara el clor!6eicol*ue inhibe la biosntesis de protena#

M!+eri!les # re!c+i%os"

Preparar aldo B< y autocla9ar# (triptona 2,5 +, e)tracto de le9adura 1,25 +, Fal $,35 +, a+ua csp

25. !l"#istribuir una placa de !edio /


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'!r+e e9eri8e+!l"

A!li7!r los resl+!:os>

n resu!en

n ausencia de lactosa, no hay produccin de en=i!a Bac (Bac est unido al operador"#

uando hay lactosa presente, pero ta!biCn hay una uente de carbono preerida en el !edio (co!ola +luocsa", entonces slo una pe*ueEa cantidad de en=i!a se produce (Bac no est unido aloperador"#

uando la lactosa es la uente preerida de carbono (por eje!plo, en ausencia de +lucosa" A/Pc-AP se unen al pro!otor y la produccin de la en=i!a Bac se !a)i!i=a#

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TRABA$O 'RACTICO .CUANTIICACION DE GLUCOGENO EN TE$IDOS

O*e+i%os"

Adoptar conoci!ientos e)peri!entales en la cuantiicacin de polisacridos (+luc+eno"#

I+ro:cci="

l +luc+eno es un pol!ero de +lucosa, ra!iicado, distribuido unda!ental!ente en h+ado y

!Ksculo, cuya uncin es la de ser una or!a de al!acena!iento de +lucosa cil!ente !o9ili=able#

l +luc+eno actKa co!o re+ulador de la +lucosa san+unea, al!acenndola co!o +luc+eno durante

una buena ali!entacin (+luco+eno+Cnesis" y liberndola por osorolisis (+luco+enolisis" durante el

ayuno, ya *ue en esta situacin no hay absorcin intestinal# Ba duracin del +luc+eno heptico en

ayunas es de apro)i!ada!ente 2' h# A partir de este !o!ento, la concentracin en san+re se !antiene

por sntesis de +lucosa a partir de sustancias distintas a los carbohidratos (+luconeo+Cnesis"# l !Ctodo

de e)traccin del +luc+eno de los tejidos (!Ksculo es*uelCtico, cora=n e h+ado" se reali=a pre9ia

ho!o+enei=acin de los !is!os en un potter, !ediante calenta!iento con un lcali uerte y

posterior precipitacin con etanol# (Leali=ado en ;ui!ica


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ulKrico 4% ',2 !l

Arseniato de sodio#3H2. ., +

Ble9ar a 9olu!en 1.. !l con A# onser9ar en rasco oscuro a TQ a!biente#

Testi+o de +lucosa

Pesar 4 !+ y lle9ar a 5. !l con A# oncentracin inal de +lucosa 1 !/

'!r+e E9eri8e+!l"

Bos a=Kcares reductores, en este caso la +lucosa pro9eniente de la hidrlisis del +luc+eno, se trata

con el reacti9o de o!o+yi (cobre en !edio alcalino" en caliente# l +rupo aldehdo del a=Kcar

reductor reduce el ion cKprico a cuproso y este )ido cuproso resultante es reo)idado por el reacti9o

arsenooso!olbdico de Felson a )ido de !olibdeno, de color a=ul# l color es proporcional a lacantidad de +lKcido presente en la !uestra y se co!para con un testi+o de concentracin conocida,

!idiendo la absorbancia a 5'. n!# Ba sensibilidad del !Ctodo es de .,. a .,5 M!oles#

Leaccin principal

7lucosa G uGG------------- Ac +lucurnico G uG

uGG arsenooso!olibdato ---------- uGG G o)ido de !olibdeno (color a=ul"

e trabaja con solucin testi+o de +lucosa 1 !/ de tal !anera *ue 1 !l conten+a 1 u!oles#

2$


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/edir los tubos a 5$. n!, lle9ando a . con el blanco# 7raicar en papel !ili!etrado los resultados

de la cur9a de calibracin# Lepresentar absorbancia en uncin de los M!oles de +lucosa a+re+ados#

eter!inar la concentracin de a=Kcares reductores antes y despuCs de la hidrlisis cida#

2'


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TRABA$O 'RACTICO

'RODUCCION DE 'IRU/ATO ACETALDE5IDO DURANTE LA ERMENTACION DE

GLUCOSA 'OR LE/ADURA

INTRODUCCIN

:er!entacin Ba pri!era etapa del catabolis!o de +lucosa es la produccin de piru9ato# ste

proceso, *ue se eectKa !ediante una serie de reacciones *ue in9olucran un nK!ero considerable de

inter!ediarios, se conoce co!o +luclisis# Ba reaccin total de una !olCcula de +lucosa produce dos

!olCculas de piru9ato, dos !olCculas de ATP y dos !olCculas de FAH# ste coactor se encuentra

en cantidades catalticas (es necesario reo)idarlo para *ue el proceso no se suspenda", y es utili=ado

por la cadena respiratoria para obtener ATP dando as FAG# sto no es posible en condiciones

anaerbicas y en este caso la reo)idacin se eectKa cuando el piru9ato se con9ierte en acetaldehdo,

y lue+o en alcohol#

nter!ediarios !etablicos Bos !etabolitos piru9ato y acetaldehdo se encuentran presentes

nor!al!ente en !uy baja concentracin, por lo tanto, para de!ostrar su e)istencia co!o

inter!ediarios en el ca!ino !etablico, es necesario i!pedir *ue sean transor!ados en otros

co!puestos# ste procedi!iento se usa !ucho para estudiar ca!inos !etablicos y se puede

reali=ar

-


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M!+eri!les # re!c+i%os"

- Be9adura (1 + en $. !l de Fa2HPJ'3.. !/"#

-


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