不同品种肉鸡肠道rbat和y^+lat2_mrna表达的发育性变化

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畜牧兽医学报 2009,40(1):52—58 ActaVeterinaria etZootechnica Sinica 不 同品种 肉鸡肠道 rBAT和 y+LAT2mRNA 表达的发育性变化 冯定远 ,谭会泽 ,邹仕庚 。,刘 清神 ,左建 ,董泽敏 ,叶 慧 ,张常 明 (1.华南农业大学动物科学学院 ,广州 510642; 2.广东温氏食品集团有限公司,新兴 527439;3.广东科贸职业学院,广州 510430) 要 :选用遗传背景相 同的 1日龄父母代雄性 ArborAcre(AA)和父母代雄性岭 南黄 肉雏鸡各 160羽 ,采用相 对定 量 RT-PCR方法 ,以 AA 肉鸡和岭南黄 肉鸡十二指肠 、空肠和回肠样 品为模板 ,研究不同品种肉鸡肠道碱 性氨 基酸转运载体 rBAT和 Y LAT2mRNA表达 的发育 性变化 。结果 显示 :十二指肠 和空肠 rBAT Y LAT2mR— NA 表 达 的发育性变化与 回肠有着较大 的差异 。不 同品种 肉鸡 rBAT和 Y LAT2mRNA在十二 指肠和空肠 的表 达具有相同的发育模式 ,从 2~3od不断升高 ,44d下降,55d回升;岭南黄肉鸡 rBAT和 Y。。LAT2mRNA表达丰 度的变化幅度小于 AA 肉鸡 ,AA 肉鸡 rBAT和 Y’I AT2mRNA表 达丰度在 2~30d时均高于岭南 黄肉鸡 。回肠 rBAT和 Y LAT2mRNA表达的发育性变化在岭 南黄 肉鸡 和 AA 肉鸡 间有 显著差 别 ,岭南黄 肉鸡 回肠 rBAT和 Y LAT2mRNA表达在后期(30458d)高于前期(2~16d);而 AA 肉鸡 回肠 rBAT和 y LAT2mRNA表 达在 58 d显著高于其它时间点 ,在 16d时最低 。以上结果 说 明:(1)十二指 肠和空肠 rBAT、Y LAT2mRNA表达的发育 性变化与 回肠有着较大的差异 ,这表 明肠道近端和远端在碱性氨基酸 吸收 的功能上 可能 有差异 ;(2)不 同品种 肉鸡 十二指肠和空肠 rBAT、Y LAT2mRNA 的表 达具 有相 同的发育模式 ,但在时间点上有一定 的差异 ,而 与 回肠 的表 达模式不 同,表明 rBAT和 Y LAT2mRNA 的表达受到发育 阶段 、品种 和肠段 的影 ;(3)回肠 rBAT和 y LAT2 mRNA表达的发育性变化在岭南黄肉鸡和 AA肉鸡间有显著差别。 关键词 :肉鸡 ;肠道 ;碱性 氨基酸转运载体 ;发育性表达 中图分类号 :$831.1 文献标识码:A 文章编号:O366—6964(2009)01-0055—07 OntogeneticExpression ofrBAT and Y+LAT2 mRNA in IntestineofBroiler FENG Ding—yuan ,TAN Hui—ze’,ZOU Shi—geng’。,LIU Qing—shen , ZUO Jian—jun ,DONG Ze—min ,YE Hui,ZHANG Chang—ming (1.College ofAnimalScience,SouthChinaAgricultural University, Guangzhou 5 10642, China ;2.Guangdong W en SGroup Co.,Ltd,Xinxing 527439,China; 3.Guangdong Vocational Collegeof Science and Trade,Guangzhou 510430,China) Abstract:1 6O 1-day—old parentalmaleArborAcre (AA )broilersand 1 60 1一day—oldparentalmale Lingnan Y ellow broilerswere randomly divided into 4 replicates,respectively. Ontogenetic ex— pressionof rBAT andy。。LAT2mRNA induodenum ,j ej unum andileum of AA broilers andLing— nan Yellow broilerswere determined by relative quantitative RT—PCR. It was found that: (1) Ontogeneticexpression ofrBAT and y1。LAT2mRNA in duodenum andjejunum wasdifferent from that inileum. (2)OntogenypatternsofrBAT andy LAT2mRNA induodenum andj ej u— hum wereconsistentbetween AA broilersand Lingnan Yellow broilers.TheabundanceofrBAT and Y。。LAT2m RN A in tw o breedsw asincreased from day 2 to day 30, then decreased on day 44 收稿 日期 :2007—12-03 基金项 目:国家重点基础研究发展计划(973)项 目(2004CBl17501);广东省科 技攻关项 目(2005B20201016);广东省联合基金项 目(U0731004) 作者简介 :冯定远 (1961),男 ,教授,博 导,主要从事动物营养需要与分子营养研究 *通讯作者 :冯定远 ,E—mail:fengdyr@scau.edu.an

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Page 1: 不同品种肉鸡肠道RBAT和Y^+LAT2_MRNA表达的发育性变化

畜牧兽医学报 2009,40(1):52—58

Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica

不同品种肉鸡肠道 rBAT和 y+LAT2 mRNA

表达的发育性变化

冯定远 ,谭会泽 ,邹仕庚 。,刘清神 ,左建军 ,董泽敏 ,叶 慧 ,张常明

(1.华南农业大学动物科学学院,广州 510642;

2.广东温氏食品集团有限公司,新兴 527439;3.广东科贸职业学院,广州 510430)

摘 要:选用遗传背景相同的 1日龄父母代雄性 Arbor Acre(AA)和父母代雄性岭南黄肉雏鸡各 160羽,采用相

对定量 RT-PCR方法,以 AA肉鸡和岭南黄肉鸡十二指肠、空肠和回肠样品为模板,研究不同品种肉鸡肠道碱性氨

基酸转运载体 rBAT和 Y LAT2 mRNA表达 的发育 性变化 。结果 显示 :十二指肠 和空肠 rBAT 和 Y LAT2 mR—

NA表达的发育性变化与回肠有着较大的差异。不同品种肉鸡 rBAT和 Y LAT2 mRNA在十二指肠和空肠 的表

达具有相同的发育模式 ,从 2~3o d不断升高 ,44 d下降,55 d回升;岭南黄肉鸡 rBAT和 Y。。LAT2 mRNA表达丰

度的变化幅度小于 AA肉鸡 ,AA肉鸡 rBAT和 Y ’I AT2 mRNA表达丰度在 2~30 d时均高于岭南黄肉鸡。回肠

rBAT和 Y LAT2 mRNA表达的发育性变化在岭南黄肉鸡和 AA肉鸡间有显著差别,岭南黄肉鸡回肠 rBAT和

Y LAT2 mRNA表达在后期(30458 d)高于前期(2~16 d);而 AA肉鸡回肠 rBAT和 y LAT2 mRNA表达在 58

d显著高于其它时间点,在 16 d时最低。以上结果说明:(1)十二指肠和空肠 rBAT、Y LAT2 mRNA表达的发育

性变化与回肠有着较大的差异,这表明肠道近端和远端在碱性氨基酸吸收的功能上可能有差异;(2)不同品种肉鸡

十二指肠和空肠 rBAT、Y LAT2 mRNA的表达具有相同的发育模式,但在时间点上有一定的差异,而与回肠的表

达模式不同,表明 rBAT和 Y LAT2 mRNA的表达受到发育阶段、品种和肠段的影响;(3)回肠 rBAT和 y LAT2

mRNA表达的发育性变化在岭南黄肉鸡和 AA肉鸡间有显著差别。

关键词:肉鸡;肠道;碱性氨基酸转运载体;发育性表达

中图分类号:$831.1 文献标识码:A 文章编号:O366—6964(2009)01-0055—07

Ontogenetic Expression of rBAT and Y+LAT2 mRNA in Intestine of Broiler

FENG Ding—yuan ,TAN Hui—ze ’ ,ZOU Shi—geng ’。,LIU Qing—shen ,

ZUO Jian—jun ,DONG Ze—min ,YE Hui ,ZHANG Chang—ming

(1.College of Animal Science,South China Agricultural University,

Guangzhou 5 10642,China;2.Guangdong Wen S Group Co.,Ltd,Xinxing 527439,China;

3.Guangdong Vocational College of Science and Trade,Guangzhou 510430,China)

Abstract:1 6O 1-day—old parental male Arbor Acre(AA)broilers and 1 60 1一day—old parental male

Lingnan Yellow broilers were randomly divided into 4 replicates,respectively. Ontogenetic ex—

pression of rBAT and y。。LAT2 mRNA in duodenum,j ej unum and ileum of AA broilers and Ling—

nan Yellow broilers were determined by relative quantitative RT—PCR. It was found that:(1)

Ontogenetic expression of rBAT and y1。LAT2 mRNA in duodenum and jejunum was different

from that in ileum.(2)Ontogeny patterns of rBAT and y LAT2 mRNA in duodenum and j ej u—

hum were consistent between AA broilers and Lingnan Yellow broilers.The abundance of rBAT

and Y。。LAT2 mRNA in two breeds was increased from day 2 to day 30,then decreased on day 44

收稿日期:2007—12-03

基金项目:国家重点基础研究发展计划(973)项 目(2004CBl17501);广东省科技攻关项目(2005B20201016);广东省联合基金项目(U0731004)

作者简介:冯定远(1961),男,教授,博导,主要从事动物营养需要与分子营养研究

*通讯作者:冯定远,E—mail:fengdyr@scau.edu.an

Page 2: 不同品种肉鸡肠道RBAT和Y^+LAT2_MRNA表达的发育性变化

1期 冯定远等:不同品种肉鸡肠道 rBAT和 y LAT2 mRNA表达的发育性变化 53

and increased again on day 58.W hI1e compared two breeds directly,the change range of rBAT

and y LAT2 mRNA in AA broilers was larger than that in Lingnan Yellow broilers.The abun—

dance of rBAT and Y。。LAT2 mRNA in AA broilers was higher than that in Lingnan Yellow broil—

ers from day 2 to day 30.(3)Ontogeny patterns of rBAT and Y1。LAT2 in ileum was different be—

tween tWO breeds.These results indicate that:(1)Ontogeny patterns of rBAT and y LAT2 mR—

NA in duodenum and jejunum was different from that in ileum,indicating that the function of eat—

ionic amino acid absorption in proximal intestine may be different from that in distal intestine.

(2)Ontogeny of rBAT and y LAT2 mRNA in two breeds had same pattern in duodenum and j e—

j unum,and there was difference at same development stage between AA broilers and Lingnan

Yellow broilers and ontogeny pattern between duodenum (jejunum)and ileum indicating that

rBAT and y。。LAT2 mRNA expression could be regulated by developmental stage,breed and seg—

ment of intestine. (3)Ontogeny of rBAT and y LAT2 mRNA in ileum were different between

Lingnan Yellow broilers and AA broilers.

Key words:broiler;intestine;cationic amino acid transporter;ontogenetic expression

细胞的氨基酸转运系统可以分为 中性、酸性和

碱性氨基酸转运系统,每类转运系统由多个转运机

制不同的转运载体组成口]。肠道中存在的碱性氨基

酸转运系统包括 Y 、b 、Y L和 B 。。。转运系统

在肠道不发挥主要 的转运功能,其转运蛋 白

ATB 在肠道后段表达水平较高,转运由肠道微生

物产生的 D型氨基酸 ]。肠道对碱性氨基酸的吸

收主要是通过转运系统Y 、b。’。。和 y L协同来实现

的 ]。系统 b 和 Y L的蛋白质属于异二聚体结

构,由重链和轻链组合发挥其转运功能,均属于反相

交换转运机制 。系统 b 。。主要在肠道和肾小管上皮

细胞顶端表达 。],主要从肠腔面吸收碱性氨基酸和

胱氨酸,转出中性氨基酸 ,其 重链 为 rBAT,轻链为

SLC7A9。转运系统 Y L在钠离子的协同作 用下,

对胞外的中性氨基酸有高的亲和力 ,向细胞 内转人

中性氨基酸的同时,转 出细胞内的碱性氨基酸_3 ],

该系统主要定位于肠细胞和肾小管的基底膜,其 2

个轻链 (Y LAT1和 Y LAT2)分别和重链 4F2hc

构成 2个不同转运蛋白。Y 系统包括 4个成员,其

转运蛋白分别为 CAT1~4,其中CAT1~3相互问

碱基 的 同源 性 达 到 6O 左 右 ,而与 CAT4只 有

40 _5]。 Y 转运系统属于细胞中典型的为数极少

的单向转运系统l_1 ,其转运驱动力主要是膜两侧的

电势梯度。与系统 b。’ 和 Y L不同 ,Y 系统主要是

逆着碱性氨基 酸浓度梯度 向细胞 内聚集碱 性氨基

酸 。

研究选用父母代雄性 AA鸡和岭南黄肉鸡,运

用相对定量 RT—PCR方法研究不 同品种 肉鸡十二

指肠、空肠和 回肠 rBAT、Y LAT2 mRNA 表达的

发育模式,并进行品种间比较,揭示肉鸡碱性氨基酸

反 向交换转运系统 rBAT和 Y LAT2 mRNA 的表

达规律,为碱性氨基酸营养在肉鸡生产中的应用提

供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物与样品采集

1.1.1 试验动物 选用遗传背景相同的同批次、发

育正常的 1.日龄父母代雄性 AA肉鸡和父母代雄性

岭南黄肉鸡各 160羽(快大型,8周龄上市体质量

1.5 kg),每个品种按照体质量一致的原则分为 4个

重复 ,每个重复 4O只鸡 。

1.1.2 日粮组成及营养水平 参照 NRC(1994)和

国家标准(1986)0~8周龄肉鸡营养需要设计饲料

配方,日粮组成和营养水平参照文献1-12]。于 31日

龄开始采用逐步换料的方法,至 34 IEI龄全部更换为

后期日粮。

1.1.3 饲养管理与免疫 试验在华南农业大学动

物科学学院种鸡场进行,粉料饲喂。红外取暖,自由

饮水和采食,人工持续光照,保持正常育雏温度,常

规免疫。

1.1.4 组织采样 分别于 2、16、3O、44和 58 d,每

个重复取 2只接近平均体质量的鸡(即每个处理共

8只),断颈宰杀,宰前不禁食。分离肠道,沿纵向剖

开,用 4℃预冷的磷酸缓冲液(PBS)冲洗,再用吸水

纸吸干。分别从十二指肠 U状弯曲的起始处和结

束处向下取 3 cm肠段,作为十二指肠和空肠样品;

Page 3: 不同品种肉鸡肠道RBAT和Y^+LAT2_MRNA表达的发育性变化

54 畜 牧 兽 医 学 报

从回盲韧带起始处向下取 3 cm肠段,作为回肠样

品。放人 1.5 mL离心管中,置液氮速冻,一70℃冷

冻保存。

1.2 相对定量 RT-PCR

1.2.1 样品总RNA提取 采用 Trizol(北京赛百

盛基因技术有限公司)一步抽提法提取肠道组织总

RNA,紫外比色法测定总 RNA的浓度和纯度(Ep—

pendorf BioPhotometer 260 nm)。用 1.4 甲醛变

性琼脂糖凝胶 电泳 ,根据 28S rRNA 和 18S rRNA

的灰度比评价 RNA 的质量。

1.2.2 反转录 分别准确量取 2 g各样品总

RNA进行反转录。反转录反应体积为 3O L,其中

含 Randome(10)引物 5/~mol·L。。,1 mmol·L

dNTP(北京赛百盛基因技术有限公司),2O U RNA

酶抑制剂(RNase inhibitor,TaKaRa,大连),200 U

反转录酶(MMLV RT,Promega),5 L 5×RT

Buffer。样品总 RNA、Randome(10)和 dNTP在反

转录前 70℃变性 5 min,冰上放置 5 rain,再加入其

余试剂,混匀后于 37℃反应 6O min,95℃变性 5

min。反转录产物(cDNA)--20℃保存备用。

1.2.3 目的基因引物设计和 PCR反应条件 PCR

引物采用 Primer软件设计,由北京赛百盛基因技术

有限公司合成,引物序列及参数见表 1。以 ~-actin

管家基因作为内标,对目的基因进行相对定量分析。

表 1 rBAT、Y LAT2和 ~actin基因引物参数

Table 1 Paramete~ of primer pairs for rBAT,Y LAT2 and[1-actin gene

扩增片段测序后在网站 http://www.ncbi.

nlm.nih.gov/BLAST/上 进行 BLAST 比对 ,结 果

显示目的基因序列与预测序列完全吻合,rBAT和

Y LAT2的扩增片段分别跨越了 3个和 2个内含

子 ,从而避免了基因组的污染 。

内标基因 —actin Primers(10 mo1.L一 )和

Competimers(10>mol·L ):参照 Dieffenbachl_】3]

所提供的方法,将 p—actin Primers的3 端进行修饰

(北京赛百盛基因技术有限公司),使其在 PCR过程

表 2 rBAT和 Y LAT2基因 PCR反应条件

Table 2 PCR condition of rBAT and Y LAT2

中只能与模板结合而不能延伸,得到 8~actin Com—

petimers(N H2一 —actin)。将 13-actin Primers和

Competimers均稀释至 10 ttmol·L 备用 。

PCR反应条件:采用单管法进行 PCR扩增,以

混合样(待测样品等比例混合)对 PCR反应条件、循

环数以及 —actin与 —actin Competimers的比例等

进行优化 。rBAT和 y LAT2基因 PCR反应条件

如表2所示(25 L的反应体系)。

PCR循环条件为 :94℃预变性 5 min;94℃变

性 30 S,退火温度30 S,72℃延伸 50 S;72℃延伸 1O

m 1n 。

电泳及灰度分析:取 10 L PCR产物在 2.0 9/6

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1期 冯定远等:不同品种肉鸡肠道 rBAT和 y LAT2 mRNA表达的发育性变化 55

EtBr染色的琼脂糖凝胶上电泳。图像处理及灰度

分析用 LabWorks Image Acquisition and Analysis

Software 4.0 (Ultra—Violet Products Ltd.,Cam

bridge,UK)进行 ,根据 目的基 因和 —actin PCR产

物的灰度比,确定样品中各基因表达的相对含量。

每一基因的检测,其 RT—PCR过程至少重复 2次,

直至得到相同的结果 。

1.3 数据分析

试验数据以平均数±标准误( 4-S:c)表示。用

SPSS11.0分析数据,差异显著性检验用独立样本 t

检验和单 因子方差分析 (one—way ANOVA),以

LSD方法进行多重 比较 。

2 结果与分析

2.1 不 同品种 肉鸡 十二 指肠 rBAT和 Y LAT2

mRNA表达的发育性变化

AA 肉鸡和岭南黄 肉鸡十二指肠不同时期

rBAT mRNA的表达丰度如图 1所示。岭南黄肉

鸡与 AA肉鸡十二指肠 rBAT mRNA的表达具有

相似的发育性变化;2个不同品种 肉鸡十二指肠

rBAT mRNA表达丰度均在 2 d时最低,30 d时最

高;其中岭南黄肉鸡 2 d时 rBAT mRNA表达丰度

显著低于其它各个时期 (P<0.05),AA肉鸡 2 d

时显著低于 16、3O和 58 d(P<0.05)。不同品种肉

鸡间十二指肠 rBAT mRNA的表达丰度在各个时

期 AA肉鸡均高于岭南黄肉鸡,其中在 16 d时达到

显著水平(P<0.05)。

AA肉鸡和岭南黄肉鸡十二指肠不同时期 Y

LAT2 mRNA的表达丰度如图 2所示。岭南黄肉

鸡与 AA肉鸡十二指肠 y LAT2 mRNA表达具有

相似的发育性变化 ,且与十二指肠 rBAT mRNA表

达的发育模式类似;AA肉鸡十二指肠 Y LAT2

mRNA的表达丰度变化幅度较大 ,16 d显著高于 2

d和低于 30 d(P%0.05);岭南黄 肉鸡 十二指肠 Y

LAT2 mRNA的表达丰度变化幅度较小,各个时期

间差异均不显著(P>0.05)。不同品种肉鸡间,AA

肉鸡十二指肠 Y LAT2 mRNA的表达丰度在各个

时期都高于岭南黄肉鸡,其中在 2、16和 30 d时达

到显著水平(P<O.05)。

2.2 不 同品种肉鸡空肠 rBAT和 y LAT2 mRNA

表达的发育性变化

AA 肉鸡和岭南黄肉鸡空肠不 同时期 rBAT

mRNA的表达丰度如图3所示。从图 3可以看出,

日龄/dAge

不同日龄目的基因相对于 B—actin mRNA表达丰度

的统计结果 ;AA.AA肉鸡;Y.岭南黄肉鸡;无相同

字母者 (大写字母 ,AA 肉鸡;小写字母,岭南黄 肉

鸡),表示 同一 品种不 同 日龄之间差异显著 (P<

0.05);*.表示同一 日龄不同品种间差异显著,P<

0.05,**.P<0.01;n一8,下图同

Results of statistical analysis for target gene mRNA

abundances expressed as arbitrary units relative to口一

actin mRNA.AA.AA chicken;Y.Lingnan—yellow

chicken.W ithout the same letters(capital letters for

AA and lower case letters for Y)indicate significant

difference between days in the same breed chicken

(P< O.05). *.Indicating significant difference be—

tween AA and Y at the same day(P< 0.05),* *.

P< 0.01.n一8.The figures below are same

图 1 不同品种肉鸡十二指肠 rBAT mRNA表达的

发 育性变化

Fig.1 Ontogenetic expression of rBAT mRNA in du—

odenum of different broiler breeds

2.5

1.5 Z 云

窨 吕 l

0.5

0 . . . .

AB

2 16 30 44 58

口龄/dAge

图 2 不 同品种 肉鸡十二 指肠 Y LAT2 mRNA

表达 的发 育性 变化

Fig.2 Ontogenetic expression of y LAT2 mR—

NA in duodenum of different broiler

breeds

AA肉鸡和岭南黄肉鸡空肠 rBAT mRNA的表达

丰度具有相似的发育模式,且与十二指肠 rBAT

mRNA表达的发育模式类似;AA肉鸡 30 d时空肠

rBAT mRNA的表达丰度显著高于其它各阶段(P

<0.05),44 d显著低于 30和58 d(P<0.05);岭南

黄肉鸡空肠 rBAT mRNA的表达丰度 2 d水平最

低,显著低于 16、3O和 58 d(P<0.05)。不同品种

b毛、、、、、、 l

b 、 、、 、 、 、、 > ‘■■■■

c

c

A Y a \ 、、、、

A

iii :

2 l 8 6 4 2 0

l O O 0 O

乙 暑

IJI1 】日●cI、 二 ll a

Page 5: 不同品种肉鸡肠道RBAT和Y^+LAT2_MRNA表达的发育性变化

56 畜 牧 兽 医 学 报

肉鸡间,AA肉鸡 3O d时空肠 rBAT mRNA的表达

丰度显著高于岭南黄肉鸡 (P<O.05),其它时期差

异不显著(P>0.05)。

2 16 30 44 58

口龄/dAge

图 3 不 同品种 肉鸡 空肠 rBAT mRNA 表达 的

发育性变化

Fig.3 Ontogenetic expression of rBAT mRNA

in jejunum of different broiler breeds

AA肉鸡和岭南黄肉鸡空肠不同时期 Y LAT2

mRNA的表达丰度如图 4所示 。岭南黄肉鸡和 AA

肉鸡空肠 Y LAT2 mRNA表达的发育模式比较接

近,且与十二指肠 Y LAT2 mRNA表达的发育模

式类似;AA肉鸡 Y LAT2 mRNA的表达丰度在

30 d时最高,44 d时最低,分别显著低于 2、16和 3O

d(P<O.05);岭南黄肉鸡不同时期 y LAT2 mR-

NA的表达丰度变化幅度较小,16 d时最高,在 44 d

时表达丰度有所下降。不同品种肉鸡问,AA肉鸡

y LAT2 tuRNA的表达丰度在 2和 30 d时显著高

于岭南黄肉鸡 (P<0.05)。

D

el y

I:I龄/d Age

图 4 不同品种 肉鸡空肠 Y LAT2 mRNA表达

的发育性变化

Fig.4 Ontogenetic expression of Y LAT2 mR—

NA in jejunum of different broiler

breeds

2.3 不同品种肉鸡回肠 rBAT和 Y LAT2 mRNA

表达的发育性变化

AA 肉鸡和岭南黄肉鸡 回肠不同时期 rBAT

mRNA的表达丰度如 图 5所示。AA 肉鸡 回肠

rBAT mRNA的发育模式与岭南黄肉鸡有较大差

别 ,且不同于十二指肠和空肠 rBAT mRNA的发育

模式。AA 肉鸡 回肠 16 d时 rBAT mRNA 的表达

丰度最低,显著低于其它各个时期(P<0.05),58 d

时显著高于其它各个时期( <0.05);岭南黄肉鸡

回肠 rBAT mRNA的表达丰度在 2和 16 d接近,

30 d达到最高,显著高于 2和 16 d(P<0.05)。44

d时又有所降低,58 d回升。其中58 d时与30 d接

近 ,且显著高于 2和 26 d时 (P<0.05)。在不同时

间点,不同品种肉鸡间回肠 rBAT mRNA的表达丰

度有较大 差异 ;2、44和 58 d时岭南 黄 肉鸡 回肠

rBAT mRNA的表达丰度均显 著低于 AA 肉鸡 (P

<O.05),其中58 d时达到极显著水平(P<O.01);

在 16和 30 d时,2品种肉鸡 回肠 rBAT mRNA 的

表达丰度接近。

蓍亳 墓

0 2 16 3O 44 58

口龄/dAge

图 5 不 同品种 肉鸡 回肠 rBAT mRNA 表达 的

发育性变化

Fig.5 Ontogenetic expression of rBAT mRNA

in ileum of different broiler breeds

AA肉鸡和岭南黄肉鸡回肠不同时期 Y LAT2

mRNA 的表达丰度如图 6所示 。AA 肉鸡 回肠 Y

LAT2 mRNA的发育模式与岭南黄肉鸡有较大差

别 ,且不 同于十二指肠 和空肠 Y LAT2 mRNA 的

发育模式;AA 肉鸡 回肠 16 d时 y LAT2 mRNA

的表达丰度最低,显著低 于其它各个 时期 (P<

0.05),而 58 d显著高于其它各个时期(P<O.05);

岭南黄肉鸡回肠 Y LAT2 tuRNA的表达丰度,从 2

~ 58 d逐渐升高,其中30和 44 d显著高于 2 d时

(P<0.05),与 16 d差异不显著 。58 d时与 3O和

44 d时接近 ,且显著高于 2和 16 d(P<0.05)。不

同品种肉鸡间,AA肉鸡回肠 2 d时 y LAT2 mR—

NA的表达丰度显著高于岭南黄肉鸡 (P<0.05),

其它时期差异不显著(P>O.05)。

3 讨 论

肉仔鸡生长速度快,在性成熟前的生长发育过

b彳 、、、、、、、~

B

t■■I

b 、、\、\、\ ‘I■■■

A Y ●、 ● L

2 5 1 5 O

l O

《z g

。《.瓯 唇 LL《rI+

Page 6: 不同品种肉鸡肠道RBAT和Y^+LAT2_MRNA表达的发育性变化

1期 冯定远等:不同品种肉鸡肠道 rBAT和 y+LAT2 mRNA表达的发育性变化 57

主羹

要 ;磊 —

2 16 30 44 58

口龄/dAge

图6 不同品种肉鸡回肠 y LAT2 mRNA表达

的发育性变化

Fig.6 Ontogenetic expression of Y LAT2 mR—

NA in ileum of different broiler breeds

程中,体质量的增长、器官的功能、营养物质的消化

利用率等都发生很大的变化 ,其 中包括氨基酸利用

率的变化;但肠道中氨基酸转运载体在动物不同发

育阶段表达丰度的研究至今还鲜见报道 ,研究发现

肉鸡肠道碱性氨基酸转运载体 mRNA的表达丰度

在不同时期发生显著变化。谭会泽等的研究结果表

明El4],肉鸡碱性氨基酸转运载体 rBAT和 Y LAT2

mRNA在肠道 中的肠段特异性为十二指肠 、空肠 和

回肠高于结直肠(P<0.01),而十二指肠、空肠和回

肠的表达丰度没有显 著差异 (P>0.05);并且位 于

肠上皮黏膜细胞碱性氨基酸转运载体刷状缘的系统

b ’。(rBAT)和基底膜 的系统 y L(Y。。LAT2)mR—

NA在肠道中有类似的肠段特异性,显著区别于系

统 y (CAT1和 CAT4)。作者对 肉鸡 十二指肠、空

肠和回肠 rBAT和 Y LAT2 mRNA 的发育性变化

进行 了研究 ,结果表 明,十二指肠 与空肠 rBAT和

Y。。LAT2 mRNA的表达分别具有类似的发育性变

化 ,而在回肠 中表达 的发育性变化与十二指肠和空

肠有着较大的差异,这表明肠道近端和远端在碱性

氨基酸吸收的功能上可能有所差异。

由于肠道氨基酸转运系统 b。。。。和 Y。。L分别分

布于肠黏膜细胞的刷状缘和基底膜_3 ],分别负责

从肠腔面转运碱性氨基酸到上皮细胞内和从上皮细

胞内转出碱性氨基酸到血液中,两系统相互对应。

研究发现 ,不同品种肉鸡十二指肠和空肠 rBAT和

y。。LAT2 mRNA的表达丰度具有相似的发育性变

化,这二者在转运碱性氨基酸的功能上有无直接联

系,尚需进一步研究。回肠 rBAT和 y。。LAT2 mR—

NA表达的发育性变化在岭南黄肉鸡和 AA肉鸡间

有显著差别,且不同于十二指肠和空肠,这表明肉鸡

肠道碱性氨基酸转运 载体 rBAT和 Y LAT2 mR—

NA 的表达受到发育 阶段 、品种 和肠 段的调控。在

肠道后端(回肠)碱性氨基酸转运载体 rBAT(系统

b 。。)、Y。。LAT2 mRNA(系统 y L)表达的发育性变

化在 2个品种肉鸡问的显著差异可能与肉鸡的生

长、肉产品品质的差异存在一些关系,值得进一步研

究 。

Humphrey等指出口 ,动物组织对于饲料成分

以及营养水平变化的适应性反应主要表现在这些营

养物质转运载体类型和数量的变化,日粮的化学组

成可以直接或间接影响基因表达。肉鸡肠道 rBAT

和 Y LAT2 mRNA发育表达的变化趋势与生产性

能指标 ADFI和 ADG的变化曲线相吻合,30 d以

前 rBAT和 Y LAT2 mRNA的表达显著增加,与

生产性能的直线上升相一致;这与先前对 AA 肉鸡

十二指肠和空肠钠葡萄糖转运载体(SGLT1)E17]、钠

氢交换载体(NHE2)口 、寡肽转运载体(PepT1)E18]

mRNA表达 的研究结果较 为一致 ,表明 rBAT、Y。。

LAT2和 SGLT1、NHE2、PepTl一样作为肠道营

养物质吸收转运的主要功能载体,其对 日粮营养水

平及换料应激有着相似的反应。

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