secuenciación de adn
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SECUENCIACIÓN DE ADNMÉTODO DE SANGER
BECERRIL CUEVAS CARLA ALEJANDRA.
6HM4
INSTITUTO POLITECNICO NACIONALESCUELA NACIONAL DE MEDICINA
Y HOMEOPATIA
¿Qué es la secuenciación de ADN?
Consiste en un conjunto de técnicas y métodos bioquímicas que nos permite determinar mediante un análisis detallado el orden de los nucleótidos en el ADN.
FREDERICK SANGER
1958 insulina bovina secuencia proteica.
1977 secuencia el genoma del bacteriófago Phi-X174.
¨El primer organismo cuyo genoma fue
secuenciado¨
1980 segundo Nobel de química.
Se necesita…. ADN molde o segmento de ADN. ADN polimerasa. (añadir BN). Cebador. Nucleótidos ( Adenina, Citosina,
Guanina, Timina)
Nucleótidos didesoxiCarece del grupo hidroxilo de la posición 3´
Como sucede…
La cadena molde de ADN se une el cebador, un oligonucleótido corto de 20 bases.
A partir de este la ADN polimerasa comenzara a trabajar, agregando
nucleótidos de 3´a 5´Hasta que es colocado un nucleótido
didesoxi, que al carecer del grupo OH, evitara la unión de un nuevo nucleótido.
Marcando un paro y dando como resultado cadena de distintos tamaños.
Dentro del método de Sanger se busca hacer cuatro reacciones diferentes de síntesis de ADN usando un nucleótido didesoxi distinto.
Terminada la electroforesis, se pone en contacto con una película fotográfica de autoradiografia
Los productos de cada una de las muestras se colocan en carriles diferentes del gel.
Los fragmentos de ADN obtenidos se separan por tamaños mediante una electroforesis en geles verticales de acrilamina.
VENTAJAS Tiempo es relativamente corto una par de horas. Las reacciones son mas puras con menos contaminantes
que afecten la resolución del gel.
