3 :39 یپایپ ،1313 ،مود هرامش ،مهد هرود /یکشزپماد یژولویبرکیم هیرشن 92-313

یاه هیوس یور یناریا لسع روبنز رهز زا هدش جارختسا نیتیلم رثا یسررب ازونیژورئآ سانومودوس یکینیلک

*3یرقاب گنشوپ نارماک ،3یربکا اضر ،3هداز نموم نسحم ،3هداززابهش روالد ،2تایب روصنم ،1ییاضر هیضرم

ناریا ،نارهت ،نارهت تاقیقحت و مولع دحاو ،یمالسا دازآ هاگشناد ،هیاپ مولع هدکشناد ،یسانش تسیز هورگ -1 ناریا ،نارهت ،نارهت تاقیقحت و مولع دحاو ،یمالسا دازآ هاگشناد ،یکشزپماد یصصخت مولع هدکشناد ،یژولویبوتاپ هورگ رایشناد -2

ناریا ،نارهت ،ناریا روتساپ وتیتسنا ،یژولونکتویب تاقیقحت زکرم ،یژولونکتویب هورگ ،ینامرد یاه لوکلومویب و مونو هاگشیامزآ -3

1391 رهم 1 :شریذپ خیرات 1391 دادرم 11 :تفایرد خیرات

هدیکچ یاراد دارفا نآ ندوب بلط تصرف تعیبط هب هجوت اب و هدش شرازگ یدایز یاه ناتسرامیب زا ازونیژورئآ سانومودوس زا یشان یاه تنوفع

ببس سانومودوس سنج رد هدیچیپ شهج یاه مسیناکم هارمه هب اه کیتویب یتنآ زا اجبان هدافتسا .دنتسه رطخ ضرعمرد ینمیا متسیس فعض دروم رتشیب یعیبط یدیتپپ یاه کیتویب یتنآ نتفای تهج وجتسج هتشذگ ههد لالخ رد .تسا هدش کیتویب یتنآ هب مواقم یاه هنوگ ندمآ دوجوب نیدب .دوب ازونیژورئآ سانومودوس ینیلاب یاه هیوس رب نیتیلم دیتپپ یگدنشک و یراهم رثا یسررب هعلاطم نیا زا فده .تسا هتفرگ رارق هجوت SDS-PAGE تست اب رهز تیفیک ،نآ یزاس هدامآ و روبنز رهز هیهت زا سپ .دندوب سرتسد رد یلبق هعلاطم کی زا یسررب دروم هیوس 48 روظنم تیفیک سپس .دیدرگ یزاسادج نیتیلم دیتپپ (RP-HPLC) سوکعم زاف رد الاب ییاراک اب عیام یفارگوتامورک زا هدافتسا اب سپس .دش یسررب و ثارب نشولیادورکیم شور اب نیتیلم یگدنشک و یراهم تظلغ لقادح .دیدرگ یسررب SDS-PAGE زا هدافتسا اب هدش جارختسا نیتیلم لک MIC50 .دوب رهز نشکارف نیرت یلصا نیتیلم دیتپپ هک دیدرگ صیلخت لسع روبنز رهز زا نشکارف تسیب دودح .دیدرگ نییعت ینلک شرامش 33/84 .دمآ تسدب مرگورکیم 5/21 و ، 52/6 ،5/21 بیترت هب نیتیلم هب ساسح یدیئوکومریغ و یدیئوکوم یاه هیوس ،ساسح یاه هیوس ،ساسح یاه هنومن لک رد MBC50 .دندوب ساسح نیتیلم هب تبسن یدیئوکوم ریغ یاه هیوس دصرد 2/64 و یدیئوکوم یاه هیوس دصرد هب ساسح اه هیوس زا دصرد 45/44 .دمآ تسدب مرگورکیم 55 و 5/33 ،55 بیترت هب نیتیلم هب ساسح یدیئوکومریغ و یدیئوکوم یاه هیوس لباق رثا نیتیلم هک دش صخشم MBC وMIC تست جیاتن زا هدافتسا اب.دیدرگن راهم نیتیلم روضح رد اهنآ زا دصرد 18/51 دشر و هدوب نیتیلم یاه هیوس دشر هک داد ناشن جیاتن زیلانآ .تسا هتشاد فلتخم نارامیب زا هدشادج یاهازونیژورئآ سانومودوس دشر رب یگدنشک و یراهم هجوت هب یرتمک یریذپذوفن ،دوخ فارطا رد یدیراکاس یلپ یاه هیال دوجو لیلدب اه هیوس نیا .ددرگ یم راهم نیتیلم زا یرتمک رادقم اب یدیئوکوم یاه تنوفع نامرد تهج دیما هک تسا شزرا اب ظاحل نیا زا شهوژپ نیا جیاتن .دنهد یم ناشن دوخ زا یرتشیب تمواقم و هتشاد اه کیتویب یتنآ .دهد یم شیازفا ار سیزوربیاف کیتسیس یرامیب هب نایالتبم رد یسانومودوس MBC و MIC تست ،سوکعم زاف رد الاب ییاراک اب عیام یفارگوتامورک ،ازونیژورئآ سانومودوس ،نیتیلم ،روبنز رهز :یدیلک تاملک

یرقاب گنشوپ نارماک :لوئسم هدنسیون ٭ 54354866 :نفلت : ناریا ،نارهت ،ینامرد یاه لوکلومویب و مونو هاگشیامزآ -یژولونکتویب هورگ-یژولونکتویب تاقیقحت زکرم - ناریا روتساپ وتیتسنا :سردآ k_bagheri@pasteur.ac.ir :کینورتکلا تسپ

39 یپایپ ،1313 ،مود هرامش ،مهد هرود /یکشزپماد یژولویبورکیم هیرشن 231

همدقم توونوفع توولع نیرتعیاووش ازووونیژورئآ سانومودوووس

رد دوناوت یم نینچمه و هدوب یجراخ شوگ و یگتخوس نیوونچمه .(11) دوووش ینووومونپ وووعاب یووصاخ دراوووم رد موسیناگراورکیم نیا طسوت اه هیوهت اب طبترم ینومونپ .(4) تووووسا هدووووش شرازووووگ تاووووعلاطم زا یرایووووسب ادووج یووکینیلک یاووه هوونومن زا ازووونیژورئآ سانومودوووس هولمج زا ندوب زا یا هوطقن اوی توفاب روه ابیرقت و دوش یم اوب دوناوت یوم اه هیر و یراردا متسیس و ندب مرن یاه تفاب ،یعضوم تاعیاض رثا رد یتح و دنوش هدولآ یرتکاب نیا زوروب بجوم و هدش نوخ شدرگ دراو دناوت یم یرتکاب ریم و گرم دصرد تروص نیا رد هک ددرگ یمس یتپس ینوومونپ سیزوروبیف کیتسیس نارامیب رد .تسالاب رایسب هوویر تووفاب هدوونور شیووپ بوویرخت وووعاب یووسانومودوس نویا هک ییوراد تمواقم تلع هب هزورما .(41) ددرگ یم هوب نآ زا یوشان تونوفع ،دوهد یوم ناشن دوخ زا یرتکاب بلغا .(5) ددرگ یم یقلت یدج و مهم هلئسم کی ناونع ی اووه توونوفع ناوومرد رد جوویار یاووه کوویتویب یووتنآ ور تمواقم نازیم و دنتسین رثؤم ازونیژورئآ سانومودوس - یوتنآ تومواقم هوب هوجوت اوب .(13،51) تسا شیازفا هب یوه زونه هدش داجیا یاه شهج و یرتکاب نیا یکیتویب یاووه توونوفع ناوومرد هدووننک نیمووضت یکیتووویب یووتنآ یووتنآ یوجتووسج اذوول .تووسین ازووونیژورئآ سانومودوووس (Natural Source ) یوعیبط عوبنم اوب دویدج یاه کیتویب هونوگنیا ناومرد رد ار یدویدج دوفا دوناوتب توسا نکمم .دروآ دیدپ اه تنوفع

زکارم هجوت دروم یبورکیمدض یاهدیتپپ نایم نیا رد رویخا هوهد رد و هوتفرگ رارق ییوراد و یتاقیقحت فلتخم اوهنآ ییاوسانش توهج رد ،هونیمز نیا رد یدایز تاعلاطم

،اووه کویتویب یووتنآ نویا هوولمج زا .توسا هووتفرگ ترووص لماش فلتخم عبانم زا هک دنتسه لایرتکاب یتنآ یاه دیتپپ

...و ناونت مرن ،نایاپدنب ،ناتسوپ تخس ،ناروناج ،ناهایگ-ی وتنآ تویلاعف اوب اوهنآ .(41 و 31) دنا هدیدرگ جارختسا اووونا هوویلع رووب یووسوریودض و یچراقدووض و یکیتووویب هووب .دنوووش یووم صخووشم اووه مووسیناگراورکیم زا یووفلتخم و موخز میمروت ،کیتپوس رویغ و کیتپوس تاوباهتلا هوالع .(83 ) دوونراد شووقن مووه یباووستکا یوونمیا متووسیس میووظنت هزادوونا ،تووب م ژراووش یاراد یبورکیمدووض یاووه دوویتپپ و نیونژرآ .دنتوسه هنیمآدیوسا 21-55 یاراد و ،کچوک اهنآ ،یکیتاپ یفمآ راتخاس و هدوب تب م راب لوئسم نیزیل .(4) دزاوس یوم اناوت یبورکیم یاهاشغ اب طابترا یارب ار زا یعیووسو فوویط هوویلع رووب یبورکیمدووض یاووه دوویتپپ .(32) دنتسه رثوم یفنم مرگ و تب م مرگ یاهیرتکاب

Apis) لوسع رووبنز روهز رد یبورکیم دض یاه دیتپپ

melifera) موهم عوبنم کوی دوناوتیم و هتوشا د دووجو زین زا رووهز .دنووشاب فوولتخم یاووه توونوفع هوویلعرب یووعیبط زاوب روید زا و توسا لوسع رووبنز شزرا اوب یاه هدروآرف ،لوصافم مرو هولمج زا فلتخم یاه یرامیب نامرد یارب و یونمیا متوسیس یاوه یراومیب ریاس و مسیتامور ،سرقن نیوووتیلم .(42 و 61) توووسا هوووتفریم راوووک هوووب یباوووهتلا دصرد 56 ات 55 و هدوب رهز رد دوجوم دیتپپ نیرتکچوک لاووس رد .(3 و 2) دوووش یووم لماووش ار رووهز کووشخ نزو یکیژووولویب یاووه توویلاعف زا ناراووکمه و ماراتیووس 4441 نیووتیلم ی هووعطق 51 ی هدوونامیقاب لاوونیمرت -C تمووسق تویلاعف رد یگولاونآ ناوونع هوب ن آ زا و دوندرک هدافتوسا

5552 لاوووس رد .(42) دوووندرک هدافتوووسا ییایرتکابدوووض یبورکیمدوض رثا In vivo طیحم رد ناراکمه و فرازال ایدووویمالک زا یوووشان یاوووه تووونوفع یور روووب نیوووتیلم دوندرک یسررب ار سینیموه امسالپوکیام و سیتاموکارت نتفروگ راک هب اب شناراکمه و نوی 1152 لاس رد .(52) یاوه یراومیب زا یوکی ناونع هب داح تیتارکناپ زا نیتیلم .(33) دندرک یریگولج ینوفع

331 ...لسع روبنز رهز زا هدش جارختسا نیتیلم رثا یسررب

و یراووهم رووثا یووسررب دوویقحت نوویا یلووصا فدووه زا هدووش ادووج ینیلاووب یا هیوووس رووب نیووتیلم یگدنووشک رد یا هوعلاطم لاوحبات .توسا هدووب فولتخم یاه یرامیب دیقحت و هتفرگن ماجنا ینیلاب یاه هیوس رب نیتیلم رثا دروم هووک تووسا توویمها زئاووح ظاووحل نوویا زا ،دروووم نوویا رد نیوتیلم دیتپپ هک دناسریم رطاخ نانیمطا نیا هب ار نیققحم اوی و ددروگ یوم ینیلاب یاه هیوس ر کا ندرک دوبان هب رداق صاخ یرامیب کی زا هدش ادج یاه سانومودوس دناوتیم .دنک دوبان ار

راک شور و داوم رهز هیهت

Apis) یوناریا لوسع یاوهروبنز روهز هوعلاطم نیا رد

Melifera meda) شور هووب درکرهووش هووقطنم رد عووقاو هاگتوسد طوسوت اوهروبنز رهز .دش هیهت یکیرتکلا کوش روب یوکیرتکلا کویرحت دویرط زا رهز هدننک یروآ عمج یروآ عوومج تاروویی ت یوومک اووب نوووتنب لووکتورپ ساووسا یاراد هوووک یا هوووشیش موووویراوکآ کوووی .(1) دووویدرگ ییالاوب تموسق یور روب دووب هدوش یوشک میس تاحفص هوب ورش هکبش نیا یور رب اهروبنز .دش هداد رارق ودنک یووکیرتکلا ناوویرج رووثا رد و هدرووک نتووفر هار و توویلاعف کوویرحت رووثا رد لووسع یاووهروبنز .دندووش کوویرحت ار یمیوس هکبوش طوس و هدرک رطخ ساسحا یکیرتکلا و دویدرگ عوطق یوکیرتکلا ناویرج سپوس .دندز یم شین ادووج رووهز هدووننک یروآ عوومج هاگتووسد زا یمیووس هکبووش روهز تویاهن رد .دوش هداد راروق اوه ضرعم رد و دیدرگ لپلاکووسا کووی اووب شارووخ شور طووسوت هدووش کووشخ هوووب هدوووش یروآ عووومج ردووووپ و دووویدرگ یروآ عووومج وتیتوسنا رد یناومرد ی اوه لووکلومویب و موونو هاگشیامزآ یاومد رد شیاومزآ رووظنم هوب و دوش هداد لاوقتنا روتساپ .دیدرگ یرادهگن هجرد -52

رهز یزاس هدامآ هزینووید دآ روتیل یولیم کی رد ار مونو زا مرگ یلیم 55 Vortex هاگتووسد اووب هووقیقد ود تدووم هووب و هدرووک لووح اوب و هوقیقد هد تدوم هوب لصاح طولخم .دیدرگ طولخم عیام .دش ژویفیرتناس قاتا یامد رد هقیقد رد 55531 رود روتلیف یاه پویتورکیم رد و هدش هتشادرب یمارآ هب یئور عیاووم .دوویدرگ رووتلیف رووتمورکیم 2/5 ییاووشغ رووتلیف اووب راد رزویرف رد یدوعب تاشیامزآ تهج هدمآ تسد هب فافش توظلغ نییعت تهج .دش یرادهگن دارگیتناس هجرد -52 جووووم لووووط رد UV شور زا ،هدوووش صیووولخت نیوووتیلم

nm542 تووووویلپورکیم هاگتوووووسد زا هدافتوووووسا اوووووب ,Microplate Spectrophotometer) رتموتفورتکپووسا

Epoch-Biotek Instruments, USA) دیدرگ هدافتسا.

SDS-PAGE شور هب رهز زروفورتکلا یرادوقم ،هدش یروآ عمج رهز تیفیک یسررب تهج

و هدوش لوح یوقیرزت رطقم دآ رتیلورکیم 55 رد رهز زا 3 ناومز تدم رد % 5/51 دیمآ لیرکآ یلپ لژ رد سپس گنر .دیدرگ زروفورتکلا رپمآ یلیم 52 نایرج اب تعاس بوش کی تدم هب R250 ولب تنایلرب یساموک اب یزیمآ و دیوسا کیتوسا %53 اوب لژ یروب گنر و هتفرگ تروص لژ یزاوسدنتسم متسیس اب جیاتن .دیدرگ ماجنا لناتم 51%(Gel Documentation System, BioRad) تووبث .دیدرگ

زارف HPLC شور هرب ررهز زا نیتیلم جارختسا سوکعم

زا لووسع روووبنز رووهز زا نیووتیلم یزاووسادج تووهج زاووف رد الاووب ییاراووک اووب عیاووم یفارگوتاوومورک کووینکت ,HPLC (Knauer GmbH متوووسیس ،سووووکعم

Germany) نوتس و C18 کروحتم زاوف .دیدرگ هدافتسا یرووووت %55/5 یواووووح صلاووووخ لیرتینوتووووسا لماووووش

39 یپایپ ،1313 ،مود هرامش ،مهد هرود /یکشزپماد یژولویبورکیم هیرشن 131

و (A لوولحم) یلصا هدام ناونع هب دیسا کیتساوروئولف یرت %55/5 یواح یفارگوتامورک صولخ هجرد اب دآ یوعرف لالوح ناونع هب ،(B لولحم)دیسا کیتساوروئولف اوب هدنبای شیازفا یطخ تنیدارگ کی هتفر راکب دتم .دوب ،متوسیس هوب هونومن دویرزت زا لبق .دوب لیرتینوتسا لولحم .دویدرگ ماوجنا B لوولحم اوب نوتوس یزاوس لداوعتم ادتبا هدوش دیرزت نوتس هب رتیلورکیم 55 مجح رد هنومن سپس هدوش لامعا دتم .دیدرگ لامعا هدش هتفرگ رظن رد دتم و 55 ،هوقیقد 5 تدم هب B لولحم اب نوتس یوشتسش لماش و دووصرد 56 تووظلغ بیووش اووت A لووولحم لاوومعا هووقیقد هوب دوصرد 54 توظلغ بیوش اوت A لوولحم لامعا سپس هوب B لوولحم اب هرابود نوتس ،اهتنا رد .دوب هقیقد 5 تدم یاه کیپ شیامزآ یط رد .دیدرگ لداعتم هقیقد 5 تدم .دندیدرگ یروآ عمج هدش هدهاشم

اه نشکارف ندرک هزیلیفویل و -C65° یاوومد رد هدووش یروآ عوومج یاووه نووشکارف

Freeze Dryer هاگتووسد طووسوت رفووسمتا 85/5 راووشف(Christ, 2 alpha - Germany) تعاوس 82 تدوم رد .دندش هزیلیفویل

SDS-PAGE شور هب نیتیلم زروفورتکلا زرووفورتکلا شور اوب هدوش جارختوس ا نیوتیلم صولخ

-SDS) تافلوووس لیووسدود میدووس -دوویمآ لوویرکا یوولپ

PAGE) رد نیوتیلم نوشکارف .توفرگ رارق یسررب دروم اوب سپوس و هدوش لوح یوقیرزت رطقم دآ رتیلورکیم 55 زرووفورتکلا یولبق تموسق رد هدوش هداد یوضوت طیارش .دیدرگ

ینیلاب یاه هنومن یروآ عمج هوعلاطم کوی زا ازوونیژورئآ سانومودووس ی اوه هیوس

.دوندوب دووجوم هاگوشیامزآ رد و هدوش یروآ عمج یلبق

یاوه یراومیب زا درووم 48 یسررب دروم یاه هنومن دادعت کیتوووسیس ،یراردا یاوووه تووونوفع هووولمج زا فووولتخم Pseudomonas هیووووس .دوووندوب هرووویغ و سیزوروووبیف

aeruginosa ATCC27853 درادناتوسا هیووس ناونع هب .تفرگ رارق شیامزآ دروم ینیلاب یاه هیوس هارمه هب

نیتیلم ییایرتکابدض رثا یسررب یمک شور هب درادناتسا نویسناپسوس هیهت

لوکتورپ ،نیوتیلم لایرتکاب یتنآ تیصاخ نییعت تهج توفرگ راروق هدافتوسا درووم CLSI درادناتسا یللملا نیب دووونلراف کوووم هووومین لوووکتورپ نووویا ساوووسا روووب هوووکCFU/ml 51لداعم رظن دروم یاه یرتکاب .تسا 5/1 ×8 بوش کوی تدوم هوب ثارب نوتنیه رلوم تشک طیحم رد ییاویرتکاب نویوسناپسوس .دندش هداد تشک 33 یامد رد دوسر و هدش ژویفیرتناس هقیقد 5 تدم هب 5553 رود رد و هدوش هنویوسناپسوس یژوولویزیف مروس رد هدومآ تسدب زویمت دووسر .دویدرگ ژویفیرتناوس یلبق طیارش اب اددجم ناووونع هووب و هدووش هنویووسناپسوس یژووولویزیف مرووس رد هدافتوسا دروم دنلراف کم مین هیهت رد ظیلغ نویسناپسوس ،دونلراف کوم مین هیهت رد رتشیب تقد تهج .تفرگ رارق شور اووب شیاوومزآ دروووم نویووسناپسوس کوویتپا هتیووسناد ,CT-5000) رتموتفورتکپسا هاگتسد اب یرتموتوفورتکپسا

Chrom TECH, Thailand) رتمونان 526 جوم لوط رد لداووعم 45/5 -1/5 نیووب کوویتپا هتیووسناد .دووش هدووناوخ

CFU/ml 51 دادوعت ندش رت یمّکک تهج .تسا 5/1 ×4 هویهت توهج 45/5 کویتپا هتیسناد ،هدش هیهت یاه یرتکاب .دیدرگ داختنا دنلراف کم مین

ی دنررشک و (MIC ) یراررهم ارر لظ لقادررح(MBC) نیتیلم

Microdilution شور MIC ندروآ توسدب توهج

broth توهج .دوش هوتفرگ راکب هناخ 64 یاه کهاچ رد

131 ...لسع روبنز رهز زا هدش جارختسا نیتیلم رثا یسررب

ی هدوومآ تووسد هووب نویووسناپسوس زا MIC تووست ماووجنا و دویدرگ تشادرب رتیلورکیم 51 یلبق هلحرم رد یرتکاب یولیم کوی موجح هوب ثاروب نوتنیه رلوم تشک طیحم اب اووه یرتکاووب دادووعت توولاح نوویا رد .دووش هدناووسر رووتیل

CFU/ml 51 اوه کوهاچ ماومت رد ادتبا .دشاب یم 5/1 ×6 هوتخیر ثاروب نووتنیه رلوم تشک طیحم رتیلورکیم 551 هب ثارب نوتنیه رلوم اب نیتیلم مرگورکیم 551 سپس .دش لوا کووهاچ هووب و هدووش هدناووسر رووتیلورکیم 551 مووجح رلپموس کومک هوب ندروک طوولخم زا دعب .دیدرگ هفاضا هوووب و هدوووش تووشادرب لوا کوووهاچ زا رووتیلورکیم 551 هوب روخآ کهاچ ات لمع نیا .دیدرگ هفاضا مود کهاچ زا زووین رووتیلورکیم 551 .دوویدرگ رارووکت تروووص نیوومه 551 سپس .دش هتخیر رود و هدش تشادرب رخآ کهاچ51) یرتکاب رتیلورکیم هفاوضا اوه کوهاچ مامت هب (5/1×5 لوخاد رد تعاوس 52 اوت 61 تدوم هوب تویلپورکیم .دش هووجیتن سپووس .دوویدرگ هووبوکنا 33 یاوومد رد روتاووبوکنا کووهاچ نیرووخآ .دووش تووبث و هدهاووشم MIC شیاوومزآ .دش هتفرگ رظن رد یراهم تظلغ لقادح ناونع هب فافش ماومت زا ،یگدنوشک تظلغ لقادح ندروآ تسدب تهج و هدوش تشادرب هنومن رتیلورکیم 55 فافش یاه کهاچ تدم هب 33 یامد رد راگآ نوتنیه رلوم تشک طیحم رد دووشر یاووه یوونلک دادووعت .دندووش هداد تووشک تعاووس 82 .دوویدرگ هبووساحم MBC رادووقم و دووش شرامووش هووتفای 44/44 نآ رد هوک تسا یتظلغ یگدنشک تظلغ لقادح .دنشاب هتفر نیب زا اه یرتکاب دصرد

جیاتن SDS-PAGE شور هب نیتیلم و رهز زروفورتکلا

نیوب ادودوح روهز ی اوه نیئتوروپ یلوکلوم نزو فیط داد ناشن زروفورتکلا هجیتن .دوب نوتلادولیک 541 یلا 4/2 و هدوووب صخاوش روتمک یلووکلوم نزو اوب یاهدویتپپ هوک

دونهد یوم لیکوشت ار رهز هدنهد لیکشت یازجا نیرتشیب صلاوخ اوبیرقت صیلخت زا دعب نیتیلم نشکارف .(1 لکش) دووب هوتفرگ رارق نوتلاد ولیک 4/2 هدودحمرد دناب کت و .(1 لکش)

زارف HPLC شور هرب ررهز زا نیتیلم جارختسا سوکعم

صیخشت لباق نشکارف 52 ،رتمونان 812 جوم لوط رد نوشکارف نیا .دوب نیتیلم هب طوبرم یلصا نشکارف و هدوب هداد لیکشت ار اه نشکارف لک تحاسم زا %4/35 "ابیرقت زا ،(هوقیقد 8 اوب لداوعم) 5/25 ات 5/38 هقیقد دودح رد و دوصر د لداوعم ناومز تدوم نویا .دش جراخC18 نوتس لکش) دشاب یم دصرد 5/38 ات 5/28 نازیم زا لیرتینوتسا2).

ییایرتکابدض رثا یسررب %52 و راردا زا %45/32 ، هوشارت زا اوه هونومن 14/22%

%18/51 ) دراووم ریاس مه %52 و سیزوربیف کیتسیس زا ،یعاوخن یز م عیام زا %81/8 ،نوخ زا % 52/6 ،مخز زا MIC50 .دندوب (یلصفم عیام زا 45/2 و وفدم زا 45/2% و یدوویئوکوم یاووه هیوووس ،ساووسح یاووه هیوووس لووک ، 52/6 ،5/21 بویترت هب نیتیلم هب ساسح یدیئوکومریغ ی اوه هیووس دصرد 2/64 .دمآ تسدب مرگورکیم 5/21 و یدویئوکوم ی اوه هیووس دوصرد 33/84 و یدیئوکومریغ لوووک رد MBC50 .دوووندوب ساوووسح نیوووتیلم هوووب تبوووسن و یدووویئوکوم یاوووه هیووووس ،ساوووسح یاوووه هووونومن و 5/33 ،55 بویترت هوب نیوتیلم هب ساسح یدیئوکومریغ اوه هیووس زا دوصرد 45/44 .دومآ توسدب مرگورکیم 55 رد اوهنآ زا دوصرد 18/51 دوشر و هدوب نیتیلم هب ساسح لک MIC50/MBC50 تبسن .دیدرگن راهم نیتیلم روضح هووب یدوویئوکومریغ و یدوویئوکوم یاووه هیوووس ،اووه هیوووس توسدب مود کوی و موشش کوی ،مود ک وی ربارب بیترت

39 یپایپ ،1313 ،مود هرامش ،مهد هرود /یکشزپماد یژولویبورکیم هیرشن 131

لووک MBC50 و MIC50 جیاووتن یا هووسیاقم رادووومن .دوومآ هوب ساسح یدیئوکومریغ و دیئوکوم یاه هنومن ،اه هنومن لک MIC90 .تسا هدش هداد ناشن کی رادومن رد نیتیلم و یدووویئوکوم یاوووه هیووووس ،ساوووسح یاوووه هیووووس روبارب ،رگیدومه هباوشم ،نیتیلم هب ساسح یدیئوکومریغ ،رگیدوومه هباووشم زووین اووهنآ MBC90 و مرووگورکیم 52 تبوووووسن .دووووومآ توووووسدب مروووووگورکیم 55لداوووووعم

MIC90/MBC90 و یدویئوکوم یاه هورگ و اه هیوس لک

.دومآ توسدب مود کوی ربارب ،مه هباشم ،یدیئوکومریغ ی اوه هنومن ،اه هنومن لک MBC90 و MIC90 جیاتن هسیاقم 2 رادو ومن رد نیتیلم هب ساسح یدیئوکومریغ و دیئوکوم درادناتوووسا هیووووس دوووشر .توووسا هدوووش هداد ناوووشن

Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 5/21 رد زا رتالاب هیوس نیا MBC .دیدرگ راهم نیتیلم مرگورکیم .دیدرگ شرازگ نیتیلم مرگورکیم 55 رادقم

.نیتیلم و روبنز مونو SDS-PAGE .1لکش هدش صلاخ نیتیلم :لوا کهاچ (تسار هب پچ زا)

لسع روبنز رهز :مود کهاچ نیئتورپ رکرام :موس کهاچ

.دوب هداد صاصتخا دوخ هب ار اه نشکارف لک زا % 7/31 نیتیلم نشکارف .لسع روبنز رهز مار وتامورک .2لکش

731 ...لسع روبنز رهز زا هدش جارختسا نیتیلم رثا یسررب

نیتیلم هب ساسح یدیئوکومریظ و دیئوکوم یاه هنومن ،اه هنومن لک MBC50 و MIC50 جیاتن هسیاقم .1رادومن

نیتیلم هب ساسح یدیئوکومریظ و دیئوکوم یاه هنومن ،اه هنومن لک MBC90 و MIC90 جیاتن هسیاقم .2رادومن

ثحب

هوب ازوونیژورئآ سانومودووس یناتوسرامیب یاه تنوفع شیازوفا اوب و هدووب لروتنک لباق اه کیتویب یتنآ اب یتخس ضراووع بوجوم ناتوسرامیب رد رامیب تماقا نامز تدم نیونچمه و هدوش اوه تونوفع نویا زا ریم و گرم و ینیلاب .(6 ) دوهد یوم شیازوفا تدش هب ار یناتسرامیب یاه هنیزه لویلد هوب تادووجوم نویا یوتاذ تمواقم لیلد هب رما نیا دووجو نیونچمه و اوهنآ یجراوخ اوشغ مک یریذپذوفن .(23 و 32) دووشاب یووم کوویتویب یووتنآ هووب مواووقم یاووه نژ اوووب یاوووهازوووونیژورئآ سانومودووووس دووووجو نیووونچمه Multi-Drug) هوناگدنچ یکیتو وی ب یوتنآ ی اوه تومواقم

Resistance) و هدروک داوجیا ار یداویز ینیلاب تالکشم .(52 و 3) دووشاب یووم هدووننک نارووگن رایووسب وووضوم نوویا اه هیوس نیا طسوت یناتسرامیب یمدیپا داجیا زا یتاشرازگ زا یوشان ی اوه تنوفع و هدش تبث فلتخم یاهروشک رد

،هژویو ی اوه تبقارم ،زیلاید ،یگتخوس یاه شخب رد اهنآ هووب زاووین و هدوووب کاوونرطخ رایووسب یووحارج و ،دوونویپ یوجتسج نیاربانب .(82 و 51 ،8) دراد رتشیب یاه تبقارم یوکیتنژ تمواقم هک یروط هب ،دیدج یاه کیتویب یتنآ توسا هوتفرگ رارق هجوت دروم ،دننکن داجیا اه یرتکاب رد سانومودووس یدیئوکوم یاه هیوس هک تساه لاس .(22) تومواقم اوه کیتویب یتنآ هب مک رایسب یریذپذوفن لیلدب ینیلاب تالکشم داجیا ببس و هداد ناشن نامرد هب یدایز و 31 ) ددروگ یوم رویم و گروم یدراوم رد و نارامیب رد یدیراکاوس یولپ یاه هیال دوجو لیلد هب هدیدپ نیا .(12 ریاووس و یرتکاووب فارووطا رد تاوونیژلآ سنووج زا ددووعتم و مواقم یاه نژ دوجو ،efflux پمپ هلمج زا اه مسیناکم . تسا هریغ

،هدوش ماوجنا رویخا هوهد رد هوک یتاوقیقحت هب هجوت اب اوب ییاه کیتویب یتنآ ندرک ادیپ یارب یرایسب یوجتسج

39 یپایپ ،1313 ،مود هرامش ،مهد هرود /یکشزپماد یژولویبورکیم هیرشن 831

،اووه یرتکاووب) نوگاوونوگ یاووه هداوناووخ زا یووعیبط عووبنم 31) ت وسا هدش ماجنا (ناراد هرهم و ناگرهم یب ،ناهایگ و هدوب یتاذ ینمیا متسیس هب دلعتم اه لوکلوم نیا .(41 و زا یداوویز دادووعت رووبارب رد یعاووفد متووسیس یلووصا زووج .(53 و 81) دنشاب یم هدنز یاه مسیناگرا

و یدویئوکوم ساسح یاه هیوس MIC50 جیاتن هسیاقم یاووه هیوووس دووشر هووک دووهد یووم ناووشن یدوویئوکومریغ هوب و هدوش راوهم نیوتیلم زا یرتمک ریداقم رد یدیئوکوم رویغ و یدیئوکوم ساسح یاه هیوس مامت دشر یلک روط تووظلغ زا رووتمک رووبارب 8 لداووعم یووتظلغ رد یدوویئوکوم هوسیاقم زا هدومآ تسدب جیاتن .دندیدرگ راهم ،یگدنشک

MBC50 توباث یدویئوکومریغ و یدویئوکوم ی اوه هیوس زا یروتمک ریداوقم رد یدویئوکوم یاه هیوس هک دنک یم MBC90 و MIC90 جیاوتن یوسررب .دنور یم نیب زا نیتیلم ساووسح یاووه هیوووس دووصرد 54 دووشر هووک داد ناووشن مرووگورکیم 52 رادووقم رد یدوویئوکومریغ و یدوویئوکوم نیوب زا مروگورکیم 55 رادوقم رد و هدویدرگ راهم نیتیلم ناووشن ،مود کووی رووبارب MIC90/MBC90 تبووسن .دوونتفر روب نیتیلم یدیتپپ یوراد بسانم رایسب ریثات دنیارب هدنهد .تسا یدیئوکومریغ و یدیئوکوم یاه هیوس

و Fritche طووسوت 5552 لاووس رد هووک یووقیقحت رد ی اوه هیووس ییوراد یاه تمواقم یور رب (21) ناراکمه صخوشم ،دویدرگ ماوجنا ازونیژورئآ سانومودوس ینیلاب ،منووپیمیا هووب مواووقم اووه هیوووس %11-32 دودووح هووک دووش ،ماوونورتزآ ،نیلیووسارپیپ ،میدیزاتفووس ،میپفووس ،منپورووم دوویقحت هووسیاقم .دووندوب نیووسیاماربوت و نیووساسکولفوئل

هوک دوهد یوم ناشن ناراکمه و Fritche هعلاطم اب رضاح هداد ناوشن تومواقم نیتیلم لباقم رد اه هیوس زا % 18/51 - یووتنآ زا نیووتیلم هووب تبووسن توومواقم رادووقم نوویا و ناوشن بولطم نویا .توسا هدووب روتمک جیار یاه کیتویب هوجوت دروم دیاب نیتیلم یدیتپپ کیتویب یتنآ هک دهد یم

هونیمز نویا رد یرتوشیب تاوقیقحت و هوتفرگ رارق نیققحم یاووه هیوووس یوویوراد توومواقم یووسررب .دروویگ تروووص 4552 لاوووس رد ازووونیژورئآ سانومودوووس یناتووسرامیب %21 هوووک داد ناوووشن (62) ناراوووکمه و Pillar طوووسوت %51 و منوپیمیا هوب مواوقم %61 ،منپیرود هب مواقم اه هیوس زا هدومآ توسدب جیاوتن هوسیاقم .دوندوب منپوروم هب مواقم هوک داد ناوشن ناراوکمه و Pillar دویقحت اب ریخا هعلاطم هووب توومواقم هباووشم نیووتیلم هووب تبووسن اووه هیوووس توومواقم .توسا هدووب منوپ یمیا و منپیرود زا رتمک و هدوب منپورم مزلتوسم جیاوتن دوییات اما تسا هدننکراودیما جیاتن هسیاقم .دشاب یم یرتشیب یاه هیوس دادعت یور رب هعلاطم

یگدنوشک و یراهم رثا هک داد ناشن دیقحت نیا جیاتن یاووه هیوووس زا رتووشیب یدوویئوکوم یاووه هیوووس رووب نیووتیلم دوروکیم ظاوحل زا هلئسم نیا .تسا هدوب یدیئوکومریغ دووناوت یووم و هدوووب توویمها زئاووح رایووسب ینیلاووب یووسانش .دوویامن وووضوم نوویا فوووطعم ار یددووعتم تاووقیقحت نیتیلم تب م ژراش هدیدپ نیا لیلد هک دز سدح ناوت یم لیلدب ای و نآ یافلآ یپرام یدعب هس راتخاس نینچمه و .دشاب یم رمارتت تروص هب نآ یلصا درکلمع

اوونا یور دوناوت یم نیتیلم ،اه تست جیاتن ساسا رب و یراوهم رثا ازونیژورئآ سانومودوس یرتکاب یاه هیوس اوووصوصخم اووهنآ زا یداووویز دادووعت و هتوووشاد یووبیرخت جیاوتن هوب هوجوت اوب .دونک دوباون ار یدویئوکوم یاه هیوس دوشر روب یراوهم هوجوت لوباق روثا نیوتیلم ،هدومآ تسدب فلتخم نارامیب زا هدشادج یاهازونیژورئآ سانومودوس ترووص هوب رتشیب تاعلاطم اب هدنیآ رد دناوت یم و هتشاد لوضعم لح رد یکمک و هدش ییوراد رازاب دراو یتعنص جویار ییایمیوش یاوهوراد تیمس و ییوراد یاه تمواقم هوجوت لوباق روثا شرازگ ،دیقحت نیا یلصا تیمها .دشاب رووب یکیتووویب یووتنآ تیووصاخ اووب یووعیبط دوویتپپ کووی

.تسا سانومودوس یدیئوکوم یاه هیوسدض

131 ...لسع روبنز رهز زا هدش جارختسا نیتیلم رثا یسررب

عبانم1. Benton, A.W., Morse, R.A., Stewart,

J.D., (1963). Venom collection from honeybees. Science 3589: 228-30.

2. Boeckle, S., Wagner, E., Ogris, M. (2005). C-versus N-terminally linked melittin polyethylenimine conjugates: the site of linkage strongly influences activity of DNA polyplexes. The Journal of Gene Medicine 7: 1335-47.

3. Boeckle, S., Fahrmeir, J., Roedl, W., Ogris, M., Wagner, E. (2006). Melittin analogs with high lytic activity at endosomal pH enhance transfection with purified targeted PEI polyplexes. Journal of Controlled Release 112: 240-8.

4. Bertrand, X., Thouverez, M., Talon, D., Boillot, A., Capellier, G., Floriot, C., Helias, J.P. (2001). Endemicity, molecular diversity and colonization routes of Pseudomonas aeruginosa in intensive care units. Intensive Care Medicine 27: 1263-8.

5. Church, D., Elsayed, S., Reid, O., Winston, B., Lindsay, R. (2006). Burn wound infections. Clinical Microbiology Reviews 19: 403-34.

6. Defez, C., Fabbro-Peray, P., Bouziges, N. (2004). Risk factors for multidrugresistant Pseudomonas aeruginosa nosocomial infection. Journal of Hospital Infection 57: 209-16.

7. Deplano, A., Denis, O., Poirel, L. (2005). Molecular characterization of an epidemic clone of panantibiotic-resistant Pseudomonas aeruginosa. Journal of Clinical Microbiology 43: 1198-204.

8. Diamond, G., Beckloff, N., Weinberg, A., Kisich, K.O. (2009). The roles of antimicrobial peptides in innate host defense. Current Pharmaceutical 15: 2377-92.

9. Diekema, D.J., Pfaller, M.A., Jones, R.N., Doern, G.V., Winokur, P.L., Gales, A.C., Sader, H.S., Kugler, K. (1997). Survey of bloodstream infections

due to gram-negative bacilli: frequency of occurrence and antimicrobial susceptibility of isolates collected in the United States, Canada, and Latin America for the SENTRY Antimicrobial Surveillance Program, 1997. Clinical Infectious Diseases 3: 595-607.

10. Douglas, M.W., Mulholland, K., Denyer, V., Gottlieb, T. (2001). Multi-drug resistant Pseudomonas aeruginosa outbreak in a burns unit- an infection control study. Burns 27: 131-5.

11. Fine, M.J., Smith, M.A., Carson, C.A., Mutha, S.S., Sankey, S.S., Weissfeld, L.A., Kapoor, W.N. (1996). Prognosis and outcomes of patients with community-acquired pneumonia. A meta-analysis. Journal of the American Medical Association 275: 134-41.

12. Fritsche, T.R., Stilwell, M.G., Jones, R.N. (2005). Antimicrobial activity of doripenem (S-4661): a global surveillance report (2003). Clinical Microbiology and Infection 11: 974-84.

13. Hancock, R.E., Patrzykat, A. (2002). Clinical development of cationic antimicrobial peptides: from natural to novel antibiotics. Current Drug Targets. Infectious Disorders 2: 79-83.

14. Hancock, R.E. (2000). Cationic antimicrobial peptides: towards clinical applications. Expert Opinion on Investigational Drugs 9: 1723-9.

15. Harris, A., Torres Viera, C., Venkataraman, L., Ddegirolami, P., Samore, M., Carmeli, Y. (1999). Epidemiology and clinical outcomes of patients with multiresistant Pseudomonas aeruginosa. Clinical Infectious Diseases 28: 1128-83.

16. Hoskin, D.W., Ramamoorthy, A. (2008). Studies on anticancer activities of antimicrobial peptides. Biochimica et Biophysica Acta – Biomembranes 1778: 357-75.

17. Jeffrey, B.L., Carolyn, L.C., Gerald, B.P. (2002). Lung infections associated with cystic fibrosis. Clinical Microbiology Reviews 15: 194-222.

39 یپایپ ،1313 ،مود هرامش ،مهد هرود /یکشزپماد یژولویبورکیم هیرشن 111

18. Joklik, W.K., Willet, H.P., Amos, D.B., Wilfert, C.M. (2002). Zinsser Microbiology, 20th ed., Norwalk: application & lange. pp: 576-83.

19. Lars-Ove, B., Julika, M., Lea-Jessica, A., Deike, V., Thomas, P. (2012). Antimicrobial peptides: multifunctional drugs for different applications. Polymers 4: 539-60.

20. Lazarev, V.N., Shkarupeta, M.M., Titova, G.A., Kostrjukova, E.S., Akopian, T.A., Govorun, V.M. (2005). Effect of induced expression of an antimicrobial peptide melittin on Chlamydia trachomatis and Mycoplasma hominis infections in vivo. Biochemical and Biophysical Research Commununications 338: 946-50.

21. Marie, T.H., Francis, V., Hamidou, T., Michel, J.D. (2008). In vitro activity of antibiotic combinations against Pseudomonas aeruginosa biofilm and planktonic cultures. International Journal of Antimicrobial Agents 31: 329-36.

22. Marr, A.K., Gooderham, W.J., Hancock, R.E. (2006). Antibacterial peptides for therapeutic use: obstacles and realistic outlook. Current Opinion in Pharmacology 6: 468-72.

23. Mathew, A.G., Cissell, R., Liamthong, S. (2007). Antibiotic resistance in bacteria associated with food animals: a United States perspective of livestock production. Foodborne Pathogens and Disease 4: 115-33.

24. Moolenaar, R.L., Crutcher, J.M., San Joaquin, V.H. (2000). A prolonged outbreak of Pseudomonas aeruginosa in a neonatal intensive care unit: did staff fingernails play a role in disease transmission? Infection Control and Hospital Epidemiology 21: 80-5.

25. Paramythiotou, E., Lucet, J.C., Timsit, J.F. (2004). Acquisition of multidrugresistant Pseudomonas aeruginosa in patients in intensive care units: role of antibiotics with

antipseudomonal activity. Clinical Infectious Diseases 38: 670-7.

26. Pillar, C.M., Torres, M.K., Brown, N.P., Shah, D., Sahm, D.F. (2008). In vitro activity of Doripenem, a Carbapenem for the treatment of challenging infections caused by gram-negative bacteria, against recent clinical isolates from the United States. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 52: 4388-99.

27. Robson, Ch. (1988). Bee venom collection apparatus. US Patent No. 4739531. pp: 26.

28. Rybak, M., Skubida, P. (2007). Application coupled electrical and sound stimulation for honeybee venom collection. Journal of Apicultural Science 51: 63-6.

29. Sitaram, N., Subbalakshmi, C., Nagaraj, R. (1999). Biological activities of C-terminal 15-residue synthetic fragment of melittin: design of an analog with improved antibacterial activity. FEBS Letters 40: 1123-33.

30. Stermitz, F.R., Lorenz, P., Tawara, J.N., Zenewicz, L.A., Lewis, K. (2000). Synergy in a medicinal plant. Antimicrobial action of berberine potentiated by 5-methoxy hydnocarpin, a multidrug pump inhibitor. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 97: 1433-7.

31. Tam, V.H., Chang, K.T., Abdelraouf, K. (2010). Prevalence, resistance mechanisms, and susceptibility of multidrug-resistant bloodstream isolates of Pseudomonas aeruginosa. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 54: 1160-4.

32. Wright, G.D. (2010). Antibiotic resistance in the environment: a link to the clinic? Current opinion in microbiology 13: 589-94.

33. Yun, S.W., Bae, G.S., Kim, M.S., Park, K.C., Koo, B.S., Kim, B.J. (2011). Melittin inhibits cerulein-induced acute pancreatitis via inhibition of the JNK

111 ...لسع روبنز رهز زا هدش جارختسا نیتیلم رثا یسررب

pathway. International Immunopharmacology 11: 2062-72.

34. Zaiou, M. (2007). Multifunctional antimicrobial peptides: Therapeutic targets in several human diseases. Journal of Molecular Medicine 85: 317-29.

Journal of Veterinary Microbiology, Volume 10, Issue 2, 2014

The Antibacterial Activity of Melittin Derived from Iranian Honeybee Venom on Clinical Isolates of Pseudomonas aeruginosa

Rezaei, M.1, Bayat, M.2, Shahbazzadeh, D.3, Momenzadeh, M.3, Akbari, R.3,

Pooshang Bagheri, K.3*

1- Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Sciences and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran

2- Associate Professor, Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Specialized Sciences, Sciences and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran

3- Laboratory of Venom and Biotherapeutics Molecules, Department of Biotechnology, Biotechnology Research Center, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran

Received Date: 2 August 2013 Accepted Date: 23 September 2013

Abstract: Infections caused by Pseudomonas aeruginosa have been reported from many hospitals, and according to its opportunistic nature, Pseudomonas aeruginosa invades to immunocompromised patients and controlling the following infection is so hard. Antibiotics misusage beside complex mutation mechanisms in pseudomonas genus led to resistance against many antibiotics. During the past decade, tracing for natural antimicrobial peptide is more considered. Among them, melittin has been extracted from honey bee venom and its antibacterial activity is being examined. The main goal of this study was to evaluate antibacterial activity of melittin against clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa. 48 Clinical strains were present from previous study. Honey bee venom was prepared using electrical stimulation and the quality of venom was confirmed by SDS-PAGE. Melittin was isolated from the venom using a linear gradient of acetonitrile and C18 column by Reverse Phase-High Performance Chromatography (RP-HPLC) Technique. Minimal Inhibition and Bactericidal concentration of melittin were examined on clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa. Honey bee venom consisted of twenty distinct fractions in which melittin was the major one. MIC50 for melittin against all; mucoid, and non-mucoid sensitive isolates, were 12.5, 6.25, and 12.5 μg respectively. Among mucoid and non-mucoid strains, 94.73 and 86.2 % were sensitive to melittin respectively. MBC50 for melittin against total, mucoid and non-mucoid isolates were 50, 37.5, and 50 μg respectively. Totally, 89.58 % were sensitive to melittin and 10.41 % were not inhibited. The results obtained from MIC and MBC tests showed that melittin had significant inhibitory and bactericidal effect on clinical isolates of pseudomonas aeruginosa. According to the results, the less amount of melittin can suppress the growth of mucoid strain of pseudomonas. These strains due to existence of polysaccharide layers around bacteria have less permeability to antibiotics and expose more resistance. This study would be of great value to the treatment of cystic fibrosis patients with pseudomonas infections. Keywords: Honey bee venom, Melittin, Pseudomonas aeruginosa, RP-HPLC, MIC, MBC.

*Corresponding author: Pooshang Bagheri, K. Address: Laboratory of Venom and Biotherapeutics Molecules, Department of Biotechnology, Biotechnology

Research Center, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. Tel: 021-66480780 Email: k_bagheri@pasteur.ac.ir