病原生物学与免疫学教研室 张艳平

导入新课

细菌生长繁殖需要哪些条件？

能力目标： 进行细菌的接种与培养以及鉴定细菌，了解传染病的实验诊断方法；规范地进行无菌操作。知识目标： 1 、了解培养基制备的基本程序，掌握常用培养基的种类和用途。 2 、熟悉细菌的分离培养技术，掌握细菌在培养基上的生长现象及意义。 3 、了解细菌的代谢产物及所具有的不同生化反应，以利细菌的鉴定和鉴别。

训练项目：细菌培养 学生分组进行细菌接种培养，观察常用的培养基以及细菌在培养基上的生长现象和细菌的生化反应，记录结果并讨论分析。

教学目标与训练项目

细菌培养

一、常用培养基种类二、细菌的接种法三、细菌在培养基上生长现象四、常用生化反应五、正常人体咽喉部细菌检查

1、培养基的概念：

2、培养基的制备一般程序：

称→溶→调 pH→分装→灭菌备用。

一、常用培养基种类

一、常用培养基种类

厌氧培养基

基础培养基

营养培养基

选择培养基

鉴别培养基

3 、依用途不同分类

液体培养基

半固体培养基

固体培养基

一、常用培养基种类

4、依物理性状不同分类

1. 斜面培养基接种法2. 半固体培养基接种法3. 液体培养基接种法

二、细菌的接种法

（一）分离培养

1. 平板分离划线接种法

（二）纯培养

1. 平板分离划线接种法

接种方法 培养结果

12

34

接种方法 培养结果

菌苔

菌落

注意事项：

1. ① 区和②区之间要灭菌

2. ④ 区不要接上①区

3. 用力适当，不要划破琼脂表面

4. 注意无菌操作

2. 半固体培养基接种法

菌种：大肠杆菌、葡萄球菌

方法：穿刺接种

结果：沿穿刺线生长——动力 -

扩散生长——动力 +

半固体培养基

动力 - 动力+

穿刺线模糊

穿刺线清楚

3. 液体培养基接种法

液体培养基中

沉淀生长

沉淀生长

混浊生长

混浊生长

菌膜生长

菌膜生长

三、细菌在培养基上生长现象

沉淀 —成链生长浑浊—均匀分散生长菌膜—表面生长（需氧菌）

1. 固体

2. 半固体

3. 液体

菌落 菌苔

动力 + 动力 -

实验结果：

1. 平板分离培养大肠杆菌菌落：扁平、宽大、无色素金葡菌菌落：小而凸、金黄色脂溶性色素

2. 半固体穿刺接种大肠杆菌：沿穿刺线扩散生长 / 动力 +

葡萄球菌：沿穿刺线生长 / 动力 -

3. 液体培养基

链球菌—沉淀生长（成链）葡萄球菌—浑浊生长（均匀分散）枯草杆菌—菌膜生长（表面）

四、常用生化反应

红色 -

黄色 +黄色 + 气泡 +

1 、糖发酵试验

乳糖发酵管

糖发酵试验 鉴别大肠埃希菌与肠道致病菌

大肠埃希菌：

分解乳糖，产酸产气 黄色 + 气泡 +

分解葡萄糖，产酸产气 黄色 + 气泡 +

肠道致病菌 （如痢疾志贺菌和伤寒沙门菌）：

不能分解乳糖，红色 -

分解葡萄糖，产酸不产气，黄色 +

2 、硫化氢试验 + （ FeS 黑色）

黑色沉淀 + ；无黑色沉淀 -

红色 -

黄色 +黄色 + 气泡 +

3 、克氏双糖铁培养基

黑色沉淀 +

细菌的生化反应实验结果：

生化反应

菌种乳 糖 葡萄糖 硫化氢

大肠埃希菌 + + -

痢疾志贺菌 - + -

伤寒沙门菌 - + -

变形杆菌 - + +

五、正常人体咽喉部细菌检查（操作）

材料： 血平板、咽拭子

方法： 平板分离划线接种法

甲链菌落：细小、狭窄的草绿色溶血环乙链菌落：细小、宽大的透明溶血环

结果：

1 、常用培养基的种类及用途；2 、细菌的生长现象；3 、细菌生化反应的意义。

实验小结

实验报告：

1、记录常用培养基的种类。2、记录细菌生长现象。3、记录细菌的生化反应