ingeniero farmacÉutico

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA

INFORME TÉCNICO DE LA OPCIÓN CURRICULAR EN LA MODALIDAD DE:

ESTANCIA INDUSTRIAL

TITULO:

“LÍMITE MICROBIANO”

QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE:

INGENIERO FARMACÉUTICO

PRESENTA:

AGUILAR ROMERO ARLETTE

MÉXICO, D.F. MAYO DE 2009

ASESOR EXTERNO: QBP. MA. DE JESÚS PURECO OJEDA

ASESOR INTERNO: QBP. MIRIAM JUÁREZ JUÁREZ

EVALUADORES: QFB. MA. DE LOURDES MORENO RIVERA

IBT. VERÓNICA GABRIELA LUNA FONTAINE



“LÍMITE MICROBIANO” Arlette Aguilar Romero*, QBP Ma. De Jesús Pureco Ojeda1, QBP. Miriam Juárez Juárez2 1Jefe del departamento de Microbiología Bristol-Myers Squibb de México planta San Ángel, número telefónico 53378200 Ext 2502 e- mail [email protected]

2Departamento de Biología en la Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología Av. Acueducto s/n, Barrio La Laguna, Col. Ticomán, México, D.F. , C.P. 07340, Teléfono: 5729-6000, extensión: 56347

Palabras claves: OMAs, Hongos, levaduras, microorganismos patógenos Introducción: Los productos farmacéuticos son agentes químicos utilizados terapéuticamente para tratar enfermedades. Actualmente, los medicamentos son usados para la prevención, así como para el tratamiento de enfermedades o sus consecuencias. Se exponen los aspectos considerados en la evaluación sanitaria de productos farmacéuticos de importación y producción nacional. Se relatan los procedimientos establecidos para aprobar y considerar un producto como apto para uso o consumo humano. La evaluación de los productos farmacéuticos por el Registro sanitario se basa en el análisis de la materia prima, producto intermedio y producto terminado, de interés particular en casos necesarios. Se mencionan los análisis microbiológicos más importantes. Es importante en la producción de los medicamentos, por lo tanto su calidad, es de suma importancia ya que es la materia prima más usada y además está presente en otros procesos relacionados con dicha producción. Sin embargo, el agua también puede actuar como vehículo de microorganismos y su carga microbiana dependerá del método de obtención, distribución y/o almacenamiento. Metodología: La técnica consiste en diluir la muestra en un medio de cultivo y luego sembrar una pequeña cantidad de la dilución en una placa o bien mezclarla. A continuación, la placa debe ser incubada en las condiciones adecuadas. Una vez que se han formado colonias visibles, generalmente después de un día, se seleccionan para el recuento de colonias las placas en las que éstas están bien separadas. Las placas que tienen entre 30 y 300 colonias ofrecen una buena relación entre la rapidez del recuento y la precisión en el resultado obtenido. El número de colonias de una placa, junto con la dilución de la muestra que se inoculó en ella, nos permite calcular la concentración de células presente en la muestra original. Para el análisis de agua, recolectar la muestra. Identificar las muestras (sitio, clave y fecha), realizar los análisis utilizando material y medios esterilizados y bajo condiciones de esterilidad, colocar la membrana en la base del filtro, asegurarse de cerrar bien el embudo, colocar 100 mL para filtrar, tomar la membrana y como colocarla en una placa con el medio de cultivo, incubar las placas en posición invertida entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas, pasado el tiempo de incubación tomar lecturas y registrar en bitácora.

Resultados y discusión: Tabla 4. Resultado de los productos analizados de Febrero a Septiembre 2008

Conclusiones: En la tabla No. 4 aparece el conteo total de microorganismos presentes en cada uno de los lotes analizados, además del análisis de microorganismos patógenos objetables los cuales deben de cumplir con los límites establecidos El conteo total de microorganismos mesofilos aerobios se mantienen dentro de los límites establecidos para cada uno de los productos y los resultados de microorganismos objetables durante el periodo de Febrero a Septiembre fueron ausentes La materia prima es importante la investigación de microorganismos patógenos objetables debido a que la materia prima constituye una de las principales fuentes de contaminación, ya que si ésta contiene microorganismos pueden contaminar el producto del cual forman, durante el análisis microbiológico la materia prima cumplió con las especificaciones Referencia:

1. Farmacopea de los Estados Unidos de América; Formulario Nacional; Vol. 1; Edición anual en español (USP)

2. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; octava edición; Vol. I 2004; México (FEUM)

3. http://www.bristol.com.mx 4. NOM-059-SSA1-1993 Buenas practicas de

fabricación 5. NOM-073-SSA1-2005 Estabilidad de Fármacos y

Medicamentos

Tabletas

Producto Lote Análisis Especificaciones Dilución Resultado

A PT001 Mic Mesófilicos Aerobios Max 100 UFC/ g 1:10 <10

Hongos y levaduras Max 10 UFC/ g 1:10 <10

B PT002

Mic Mesófilicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10


E. coli Ausentes 1:10 Ausente

C PT003




Salmonella Ausentes 1:10 Ausente

D PT004







Dedicatorias

A Dios por haberme permitido llegar hasta este punto y haberme dado salud para lograr mis objetivos, además de su infinita bondad y amor.

A mi madre Francisca Romero por haberme apoyado en todo momento, por sus consejos, sus valores,

por la motivación constante que me ha permitido ser una persona de bien, pero más que nada, por su

amor.

A mi padre Tomas Aguilar por los ejemplos de perseverancia y constancia que lo caracterizan y que

me ha infundado siempre, por el valor mostrado para salir adelante y por su amor.

A mis Hermanos Dolores, Javier, Janeth, Jaime y Tomas por que siempre he contado con ellos para todo, gracias a la confianza que siempre nos hemos tenido; por el apoyo y amistad

Amigos que gracias al equipo que formamos logramos llegar hasta el final del camino y que hasta el

momento, seguimos siendo amigos: Elvia Yanit García, Guadalupe Hernández, Liliana Lizeth García

y Miguel Ángel Soto

Abraham Vásquez por aguantarme en todos estos momentos difíciles y por enseñarme que no hay

limites, que lo que me proponga lo puedo lograr y que solo depende de mi.

Y a todas aquellas personas que de una u otra forma, colaboraron o participaron en la realización de

este proyecto, hago extensivo mi más sincero agradecimiento.

Arlette Aguilar Romero


1

1 Introducción y Descripción de la compañía 5

1.1 Misión 7

1.2 Visión 8

1.3 Historia 8

1.4 Giro de la empresa 9

1.5 Organigrama 11

2 Proyecto: " LÍMITE MICROBIANO" 12

2.1 Introducción 12

2.1.1 Recuento de microorganismos viables 12

2.1.1.1 Recuento de Microorganismos Mesofílicos Aerobios 14

2.1.1.2 Investigación de microorganismos objetables 14

2.1.1.3 Efectividad de Preservativos antimicrobianos 15

2.1.1.4 Promoción de crecimiento 16

2.1.2 Estabilidades 17

2.1.3 Análisis de aguas 18

2.1.3.1 Endotoxina 19

2.1.3.2 Método de Gelificación 20

2.2 Justificación 21

2.3 Objetivos generales 22

2.4 Objetivos específicos 22

2.5 Metodología 23

3 Resultados 34

3.1 Análisis de Resultados 38

4 Conclusiones 43

5 Glosario 44

6 Anexos 45

7 Recomendaciones para estancias futuras 55

8 Referencias 56

TEMA PÁGINA


2

ABREVIATURAS

Abreviatura Significado

ABP Agar Baird-Parker

AC Agar Cetrimida

ADS Agar Dextrosa Sabouraud

AMC Agar MacConkey

ASB Agar Sulfito Bismuto

AST Agar Soya Tripticaseína

AVB Agar Verde Brillante

AVJ Agar Vogel-Johnson

BMS Bristol-Myers Squibb

CL Caldo Lactosado

CSC Caldo Selenito Cistina

CST Caldo Soya Tripticaseína

CT Caldo Tetrationato

LAL Lisado de Amebocitos de Limulus

MP Materia Prima

OMA Organismos mesófilos aerobios

OTC Automedicación

PI Producto Intermedio

PT Producto terminado

UFC Unidades Formadoras de Colonias

XLD Agar Xilosa-Lisina-Desoxicolato


3

ÍNDICE DE TABLAS

No Tema Página

Tabla 1 Agentes inactivantes

Tabla 2 Estudio de estabilidades 20

Tabla 3 Métodos y límites para los sistemas de agua de uso farmacéutico 21

Tabla 4 Comparación del Método de Gelificación (LAL) Vs Pirógenos (conejo). 22

Tabla 5 Resultado de los productos analizados de Febrero a Septiembre 2008 34

Tabla 6 Resultado de materia prima analizada de Febrero a Septiembre 2008 35

Tabla 7 Resultado de las estabilidades analizadas de Febrero a Septiembre 2008 36

Tabla 8 Resultado de los tipos de agua analizadas de Febrero a Septiembre 2008 37 Tabla 9 Características morfológicas de Staphylococcus aureus sobre medios de

cultivos selectivos-diferenciales

52

Tabla 10 Características morfológicas de Pseudomonas aeruginosa sobre medios de cultivos selectivos-diferenciales

52

Tabla 11 Características morfológicas de Salmonella sp sobre medios de cultivos selectivos-diferenciales

53

Tabla 12 Características morfológicas de Escherichia coli sobre medios de cultivos selectivos-diferenciales

53

Tabla 13 Características medios de cultivos para el análisis de agua 54


4

ÍNDICE DE FIGURAS Y GRAFICOS

No Tema Página

Figura 1 Organigrama Control de Calidad 11

Grafico 1 Método en placa para identificación de OMA 24

Grafico 2 Recuento de hongos filamentosos y levaduras 26 Grafico 3 Investigación de Pseudomona aeruginosa y

Staphylococcus aureus

28

Grafico 4 Investigación de Escherichia coli y Salmonella sp 30

Grafico 5 Análisis de Aguas Filtración al vacío 32


5

1.- DESCRIPCIÓN DE LA EMPRESA.

Bristol-Myers Squibb (BMS) es una de las diez principales empresas

farmacéuticas en el mundo. Su Misión es "prolongar y mejorar la calidad de la vida

humana a través de productos farmacéuticos, nutricionales y para el cuidado de la

salud de la más alta calidad e innovación".

La compañía tiene dos divisiones: una Farmacéutica y otra denominada Grupo

para el Cuidado de la Salud, que se compone de la empresa nutricional Mead-Johnson.

Constituye un equipo de aproximadamente 43,000 empleados en 300 sitios en más de

100 países en el mundo.

BMS se ha convertido en un líder global en materia de salud. Busca hacer una

diferencia en la vida de las personas en los lugares donde tiene operaciones,

descubriendo y desarrollando fármacos innovadores para atender necesidades no

cubiertas por los medicamentos disponibles, así como fabricando productos

nutricionales y para el cuidado de la salud de la más alta calidad.

BMS invierte anualmente casi 3 mil millones de dólares en investigación y

desarrollo de nuevos medicamentos y productos en seis centros de investigación en

diferentes países del mundo. Es la compañía que durante 2007 obtuvo más patentes en

la industria farmacéutica en los Estados Unidos y obtuvimos 9 aprobaciones sanitarias

por parte de la Food & Drug Administration (FDA) en menos de cinco años, cinco de las

cuales obtuvieron revisión prioritaria por parte de esta autoridad.

Las áreas terapéuticas de enfoque para la investigación de nuevos productos son:

Cardiología (aterosclerosis y trombosis),

Trastornos metabólicos (diabetes y obesidad),

Sistema Nervioso Central (trastornos psiquiátricos, Alzheimer y demencia),

Virología (VIH-SIDA, Hepatitis B),

Oncología e Inmunología (Artritis y trastornos autoinmunes, así como

trasplantes).

En la lucha contra enfermedades graves, las terapias basadas en derivados

proteicos de origen biológico tienen un papel cuya importancia se incrementa. Para

reafirmar el compromiso con los pacientes y continuar descubriendo medicamentos


6

innovadores, la compañía está redirigiendo sus esfuerzos y negocio hacia el campo de

la biotecnología.

La búsqueda estratégica de asociaciones con empresas biotecnológicas ayudarán a

fortalecer el portafolio de productos de la compañía, mejorando la tecnología y

manteniendo la productividad de la línea.

A través de los años, Bristol-Myers Squibb y su grupo de científicos han recibido

varias distinciones, incluyendo la "Medalla Nacional de Tecnología", el "Premio Lasker

para la Investigación Médica y el "Premio Prix Galien". La compañía se ha distinguido

año tras año como una de las mejores empresas para madres trabajadoras y es

reconocida como una compañía líder en el manejo seguro de la salud y el medio

ambiente.

BMS EN MÉXICO

A través de todas sus divisiones de negocio, BMS realiza operaciones en México

desde 1947. A lo largo de este tiempo ha desarrollado marcas muy tradicionales y

conocidas que gozan de la confianza de médicos y pacientes.

La División Farmacéutica se destacó hasta muy recientemente por el desarrollo

de antibióticos y de productos cardiovasculares con un amplio reconocimiento entre la

comunidad médica mexicana. Posteriormente BMS gradualmente inició una transición

hacia el desarrollo de productos de alta especialización, particularmente en el área

oncológica. En esta materia, contribuye a revolucionar el arsenal médico mediante

tratamientos de primera línea contra diversos tipos de cánceres.

Más recientemente, BMS ha realizado un esfuerzo considerable para traer al

país de manera simultánea a otros mercados, fármacos innovadores que representan

una nueva alternativa de tratamiento para pacientes de enfermedades graves como

leucemia, hepatitis B, VIH-SIDA, trastornos cardiovasculares y del sistema nervioso

central (esquizofrenia y trastorno bipolar). La innovación de estos productos radica en

nuevas moléculas que cuentan con mecanismos de acción novedosos y que procuran

cuidar la calidad de vida de los pacientes. (3)


7

La presencia de Bristol-Myers Squibb en México también ha sido importante en

el área de medicamentos sin receta médica o autoconsumo (OTC), pues ha

desarrollado productos que cuentan con arraigo y confianza entre la población, tales

como la línea Tempra®, el antipirético y analgésico más prescrito en México; el

antiácido Sal de Uvas Picot®, con más de 75 años en el mercado y Graneodín®, para

el alivio de las molestias en la garganta y las vías respiratorias.

Por su parte, la división nutricional Mead-Johnson también ha ejercido una

importante influencia en el país. Esta compañía cuenta con más de 100 años de historia

abocándose a la investigación y desarrollo de productos nutricionales para la población

infantil. Mead-Johnson es líder mundial a través de una línea completa de productos

entre los que destacan Kindercal®, Protevit®, Enfamil®, Visoles® y Sustagen®. En

México también manejamos los productos Choco Milk® y Cal-C-Tose®, los cuales han

acompañado a generaciones de mexicanos en su nutrición diaria.

La misión de Mead Johnson Nutricionales es convertirse en el líder mundial de

productos nutricionales pediátricos basados en investigación científica para

proporcionar a bebés y a niños el mejor comienzo en la vida.

En México cuenta con tres plantas de producción, dos de ellas en la Ciudad de

México (San Angel y Tlalpan) y otra ubicada en la Ciudad de Delicias, en el Estado de

Chihuahua. En el país BMS cuenta con una fuerza laboral de más de 2,000 empleados

que realizan operaciones a nivel nacional para garantizar la disponibilidad de nuestros

productos en todo momento con la garantía de calidad y seguridad que la ha

caracterizado a lo largo de su historia. (3)

1.1 MISIÓN DE LA EMPRESA.

Extender y prolongar la vida humana, ofreciendo al mercado productos

farmacéuticos y de cuidado personal de la más alta calidad, seguridad y confiabilidad.


8

1.2 VISIÓN DE LA EMPRESA.

Que Bristol-Myers Squibb México sea la empresa más admirada y respetada de

la Industria farmacéutica, promoviendo el alto desempeño de sus empleados,

predicando sus valores con el ejemplo.

1.3 HISTORIA DE BRISTOL MYERS SQUIBB.

Bristol-Myers co. fue fundada en el año de 1887 por dos jóvenes: William M.

Bristol y John R. Myers en Clinton, NY. Desde su inicio el eslogan de sus fundadores

era “No producimos medicamentos, sino productos para la salud que permitan una

mejor forma de vida de nuestros congéneres”.

Sus productos consistían en fármacos locales y poco a poco introdujeron el

concepto de venta sin receta en algunos medicamentos. La empresa tuvo desde su

fundación un rápido éxito y crecimiento hasta convertirse en una corporación mundial

con más de 1, 000 productos en más de 100 países en el mundo.

Mead Johnson fue fundada en 1885 por Edward Mead Johnson y su hermano

james con el nombre de Johnson and Johnson, quienes establecieron una planta de

productos farmacéuticos en N.Y.

En 1967 se fusiono Mead Johnson Co. con Bristol Myers Co. constituyendo

desde entonces uno de los consorcios de productos farmacéuticos y nutricionales más

importantes de los Estados unidos.

Los laboratorios E.R, Squibb and Sons son los más antiguos de la corporación.

Fueron fundados por el doctor Edward R. Squibb en el año de 1856 en NY.

El 3 de octubre de 1989 se realizó la fusión de Bristol-Myers Co. con E.R. Squibb

and Sons, constituyendo Bristol-Myers Squibb Co. (3)

La fusión crea una de las compañías más fuertes del mundo con una posición

líder en los siguientes 4 mercados:


9

Farmacéutico.

Productos de consumo.

Nutricional.

Material de curación.

Con el nombre de Bristol-Myers Squibb, se constituyo la quinta empresa

farmacéutica en el ámbito mundial y nacional.

Bristol-Myers Squibb Co. es una compañía global de origen Estadounidense,

diversificada en el cuidado de la salud. La compañía da empleo a más de 50, 000

personas, en el mundo y opera en más de 60 países.

Actualmente Bristol-Myers Squibb Co. se encuentra entre las compañías líderes

en el descubrimiento y desarrollo de innovadores tratamientos para enfermedades

cardiovasculares, presión alta, diabetes, SIDA, y otras enfermedades infecciosas,

antidepresivos, y analgésicos, además de material de curación. También líderes en

formulas pediátricas.

1.4 GIRO DE LA EMPRESA

Farmacéutico.

Productos de consumo.

Nutricional.

Material de curación.

La división farmacéutica es la división más grande de Bristol-Myers Squibb. Con

más de $200m de ventas en México y $14bn a nivel mundial, es una de las cinco

primeras compañías farmacéuticas del mundo, con presencia en México desde los años

40 del siglo pasado. (3)

Cuenta con áreas de especialización:

Antiinfecciosos

Cardiovasculares


10

Oncológicos

OTC (automedicación)

VIH

SNC

PRODUCTOS.

Antiinfecciosos.

Indicados en el tratamiento de infecciones en vías respiratorias, vías urinarias,

gastrointestinales y de piel.

Cardiovasculares.

Indicados en el tratamiento de hipertensión arterial, enfermedad coronaria, reducción

riesgo de infarto.

Oncológicos.

Indicados en el tratamiento de leucemia y cáncer de colon y recto.

OTC

Productos de venta directa al público. Indicados en el tratamiento de dolores (cabeza,

espalda, muelas, oídos, musculares), hiperacidez gástrica, irritaciones leves de

garganta, antiinflamatorio, etc

VIH

Indicados para el tratamiento de pacientes (adultos y niños) infectados con VIH.

Sistema Nervioso Central.

Indicado para el tratamiento de la esquizofrenia y trastorno bipolar.


11

Director Regional Ops. De

Calidad Latinoamérica Gerencia General

Ops. Técnicas Gerencia QC/QA y Resp. Sanitario MJ

Asistente

Gerencia QA y Resp

Sanitario BMS

Sup. Inspecc. Sup. Docum.

Quím.

Proceso Quím..

Materiales Quím.. Docum.

Gerencia Sist. de Calidad

Coord. GMP

Sup. Entrenamiento

Jefatura QC

Super. Microbiología Sup. Mét. Anal. y Estab.

Quím. Analista Quím. Analista Quím. Analista

1.5 ORGANIGRAMA

Figura 1. Organigrama Control de Calidad


12

2. Proyecto: LIMITE MICROBIANO

Farmacopea de los Estados Unidos (FEUM) Método General de Análisis <0571>

2.4 INTRODUCCIÓN

Durante el proceso de fabricación, almacenamiento y uso, los medicamentos son

susceptibles de contaminarse con microorganismos como bacterias, hongos y

levaduras, y por consiguiente se pueden deteriorar. (1)

La contaminación de los productos farmacéuticos, representa un riesgo para la

salud del usuario; este riesgo se relaciona con la severidad de la infección o

enfermedad que los microorganismos contaminantes, patógenos u oportunistas,

pueden producir ya que el deterioro microbiano podría conllevar a cambios en las

características físicas y químicas que conducirían a que el producto deteriorado no sea

apto para ser usado. (2)(4)(5)

Este análisis o control microbiológico de las materias primas y de los productos

farmacéuticos, involucra la realización de dos tipos de ensayos:

a. Recuentos microbianos, referidos básicamente al recuento total de bacterias

aerobias mesófilas y/o recuento de hongos y levaduras.

b. Investigación de microorganismos patógenos objetables, llamados también

indicadores específicos, como Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas

aeruginosa y Staphylococcus aureus, etc.

2.4.1 RECUENTO DE MICROORGANISMOS VIABLES

Estimar el número de microorganismo aerobios viables, hongos y levaduras en

las diferentes etapas de manufactura (materia prima, material de empaque, producto en

proceso, producto terminado) emplear la técnica de recuento en placa, así como la

identificación de microorganismos presentes en productos farmacéuticos.


13

Se trata de conocer el número total de microorganismos presentes en el

producto. Este número no guarda relación con el de microorganismos patógenos por lo

que no puede usarse como índice de su presencia

Dependiendo de las características del medio utilizado y de las condiciones de

incubación los microorganismos analizados serán miembros de poblaciones diferentes.

En general se investiga la presencia de microorganismos aerobios viables, hongos y

levaduras puede ser de interés (1)

La técnica consiste en diluir la muestra en un medio de cultivo y luego sembrar

una pequeña cantidad de la dilución en una placa o bien mezclarla. A continuación, la

placa debe ser incubada en las condiciones adecuadas. Una vez que se han formado

colonias visibles, generalmente después de un día, se seleccionan para el recuento de

colonias las placas en las que éstas están bien separadas. Las placas que tienen entre

30 y 300 colonias ofrecen una buena relación entre la rapidez del recuento y la

precisión en el resultado obtenido. El número de colonias de una placa, junto con la

dilución de la muestra que se inoculó en ella, nos permite calcular la concentración de

células presente en la muestra original

La ventaja del método de recuento en placa es su gran sensibilidad. Si se utiliza un

medio y unas condiciones de incubación adecuadas, puede detectarse incluso una

única célula viva. Además, el recuento en placa no requiere un equipo complicado. Un

inconveniente es que el recuento en placa es lento y tedioso y no es muy preciso,

porque la precisión depende del recuento de un número elevado de colonias. La

precisión aumenta con el número de colonias que se recuentan, ya que disminuye el

error debido al muestreo. (2)(6)(7)

El análisis microbiológico puede ser:

Directo, es decir, la muestra se toma de forma directa para inocular en las

placas, al medio de cultivo antes de agregarse se le inocula un inactivante

para neutralizar los conservadores que incluyen los productos los cuales

impiden el crecimiento de microorganismos dando como resultado falsos

negativos.


14

Diluciones, la muestra se transfiere al diluyente seleccionado el cual

contiene el inactivante.

2.4.1.1 RECUENTO DE MICROORGANISMOS MESOFÍLICOS AEROBIOS

• Sólidos y Líquidos miscibles en agua: pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL

de muestra y transferirlo a 90 mL del diluyente seleccionado.

• Sólidos insolubles, tabletas y grageas: pulverizar la cantidad necesaria de

muestra para obtener 10 g y transferirla a 90 mL del diluyente seleccionado.

• Líquidos no miscibles en agua: medir exactamente 10 mL del producto,

transferirlo a 90 mL del diluyente seleccionado adicionando el Polisorbato 20.

• Ungüentos y ceras: pesar 10 g de la muestra, agregar la cantidad mínima

necesaria de Polisorbato 20 para que al agitar con una barra magnética estéril se

forme una pasta, calentar en baño de agua a una temperatura que no exceda de

45°C y agregar gradualmente el volumen necesario para completar 90mL con el

diluyente seleccionado.

• Líquidos Viscosos: Para muestras viscosas que no puedan medirse con pipeta en la dilución 1:10, efectuar diluciones 1:50 o 1:100. (2)

2.4.1.2 INVESTIGACIÓN DE MICROORGANISMOS OBJETABLES

En función de la vía de administración del producto, se procede a la investigación de los

microorganismos objetables señalados a continuación: (2)

• Productos dérmicos, rectales y vaginales:

Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus.

• Productos orales:

Escherichia coli y Salmonella sp

• Materias primas:

Pseudomonas sp.


15

Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; 9a edición; Vol. I 2004; México (FEUM)

2.4.1.3 EFECTIVIDAD DE PRESERVATIVOS ANTIMICROBIANOS

Una gran cantidad de productos farmacéutico se presentan de manera general como no

estériles; sin embargo, esto no debe representar ningún riesgo para el paciente, ni

modificación de la calidad de la preparación en las condiciones normales de uso y de

empleo. Debido a esto, en algunos productos se incluye algún preservativo en la

formulación, con efectos antifúngicos y antibacterianos. La presencia de estas

sustancias hace necesario, antes de evaluar la calidad microbiológica, neutralizar la

actividad del preservativo en el producto, para demostrar que las muestras ensayadas

no inhiben el crecimiento de los microorganismos debido al preservativo o al principio

activo por sí mismo. (2)

Tabla 1. Agentes inactivantes

Preservativo Agente inactivante

Alcoholes:

Clorobutanol Polisorbato 20 u 80 al 10%

Feniletil alcohol Polisorbato 20 u 80 al 10%

Ésteres:

Metil p-hidroxibenzoato al 0,18%

Polisorbato 20 u 80 al 5%

Propil p-hidroxibenzoato al 0,02%

Lecitina al 0,07% y Polisorbato 80 al 5%

Mercuriales:

Nitrato o acetato fenil mercúrico al 0,002%


Sales cuaternarias de amonio:

Cloruro de benzalconio


Penicilina Penicilinasa Sulfas Ácido para-amonio

benzoico (PABA)

Por consiguiente para demostrar la neutralización efectiva del preservativo en el efecto

inhibidor de las muestras, se realiza un ensayo adicional, preliminar considerando como

control positivo que consiste en inocular los caldos de enriquecimiento que se utiliza en

las técnicas descritas, con 1mL de una dilución 10-3 de un cultivo de 24 horas de cada


16

uno de los microorganismos de prueba, añadir la cantidad apropiada de muestra y

proceder a la recuperación.

La validez de la prueba se basa en su capacidad para poner en evidencia los

microorganismos presentes en el producto, por lo que es necesario demostrar que bajo

las condiciones de la prueba al analizar el producto, es posible recuperar los

microorganismos de las pruebas previamente inoculados en la muestra.

Microorganismos a prueba:

Candida albicans

Aspergillus niger

Escherichia coli

Pseudomona aeruginosa


Zigosaccharomyces riouxi

Para cada producto farmacéutico se deben utilizar los microorganismos que se

requieran identificar basándose en las referencias oficiales. (2)

2.4.1.4 PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO

Para cada bacteria a ser cultivada para cualquier propósito es necesario proveer

el ambiente bioquímico y biofísico apropiado. El ambiente bioquímico (nutricional) se

hace disponible como medio de cultivo, y dependiendo de las necesidades especiales

de cada bacteria particular se ha desarrollado una gran variedad y tipos de medios de

cultivo con diferentes propósitos y utilizaciones. Los medios de cultivo son empleados

para el aislamiento y mantenimiento de cultivos puros de bacterias y también son

utilizados para la identificación de bacterias de acuerdo a sus propiedades bioquímicas

y fisiológicas.

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas

y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos

medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su


17

fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y

reproducibilidad de los resultados obtenidos. (1)

2.4.2 ESTABILIDADES

El objetivo de los estudios de estabilidad, es proporcionar evidencia

documentada de cómo la calidad de un fármaco o un medicamento varía con el tiempo,

bajo la influencia de Factores ambientales como: temperatura, humedad o luz. Los

Estudios permiten establecer las condiciones de almacenamiento, periodos de

reanálisis y vida útil.

El fabricante, tiene que diseñar y realizar los estudios de estabilidad

correspondientes que permitan obtener una información segura y demuestren cómo

varía su calidad con una formulación y un envase determinado durante el tiempo y bajo

la influencia de las condiciones de almacenamiento al que esta siendo sometido. Esta

información le permitirá proponer un periodo de validez durante el cual puede utilizarse

de forma segura y confiable.

Sabemos que inicialmente un producto farmacéutico puede distribuirse y

comercializarse en cualquier parte del mundo, por lo cual se hace necesario que el

medicamento que esta siendo elaborado y consumido en alguna parte del mundo sea

igualmente eficaz en otra. La estabilidad de los productos farmacéuticos depende

principalmente de factores ambientales, tales como temperatura y humedad, que

juegan un papel muy importante en los resultados que se obtienen en las propiedades

tanto fisicoquímicas y biológicas de los productos farmacéuticos, siendo muy importante

tomar en cuenta la forma farmacéutica y el envase primario – secundarios. (5)


18


Tabla 2. Estudio de estabilidades

Tipo de Estudio Condiciones de

Almacenamiento

Periodo Mínimo

Frecuencia de Análisis

Estabilidad acelerada 40°C ± 2°C/75% ± 5% HR 6 meses 0, 3 y 6 meses

Estabilidad a condición intermedia

30°C ± 2°C/65% ± 5% HR 6 meses 0, 3 y 6 meses

Estabilidad a largo plazo

25°C ± 2°C/60% ± 5% HR o 30°C ± 2°C/65% ± 5% HR

12 meses 0, 3, 6, 9 y 12 meses

2.4.3 ANÁLISIS DE AGUAS

El sistema de agua purificada es "El corazón de la industria farmacéutica". El

agua es un factor importante en la producción de los medicamentos, por lo tanto su

calidad, es de suma importancia ya que es la materia prima más usada y además está

presente en otros procesos relacionados con dicha producción. Sin embargo, el agua

también puede actuar como vehículo de microorganismos y su carga microbiana

dependerá del método de obtención, distribución y/o almacenamiento. Es por ello que el

agua podría considerarse una fuente potencial de contaminación bacteriana de los

medicamentos. La FEUM clasifica al agua para uso farmacéutico en diferentes tipos, de

acuerdo principalmente a su forma de presentación, uso y límites microbianos

establecidos para cada caso. (2)(9)

El aseguramiento de la calidad microbiológica del agua para uso farmacéutico

está dado en varios niveles: por un lado se requiere la validación del sistema de

producción de agua lo que requiere monitoreo, fijar y respetar lo niveles de alerta y

acción, y mantenimiento de la validación; además, se requiere el control del agua como

producto final del proceso y en cada caso crítico de la producción del fármaco, cuando

ésta es empleada como ingrediente. Los límites microbianos se establecen

dependiendo del uso que se le da al agua. (12)(13)

Existen diferentes técnicas para el control microbiológico del agua, las cuales

pueden emplearse para el recuento de los organismos viables presentes en la muestra

de agua. El análisis general contempla la determinación del número de


19


microorganismos presentes en un volumen determinado de agua, ausencia de

microorganismos coliformes y de microorganismos como fuente de sustancias

pirogénicas.

La elección del método de control microbiológico de la calidad del agua, se debe

basar en los requisitos del sistema que se esta monitoreando, considerando que no hay

ningún método que por si solo sea capaz de detectar los contaminantes microbianos

potenciales en ese sistema. Sin embargo, el método seleccionado debe ser útil para

determinar el número y tipo microorganismos que son significativos con respecto al

control del sistema y al impacto del para cada sistema individual.

Tabla 3. Métodos y límites para los sistemas de agua de uso farmacéutico

Tipo de Agua Método Tiempo de incubación

Muestra minima

Límites

Agua potable Vaciado en placa 30°C - 35°C 1 mL 500 UFC/mL

Filtración por membrana

Agua purificada Filtración por membrana 30°C - 35°C 100 mL 100 UFC/mL

Agua para inyectables Filtración por membrana 30°C - 35°C 100 mL 10 UFC/mL

2.4.3.1 ENDOTOXINA

Pruebas para detectar o cuantificar las endotoxinas bacterianas que pueden estar

presentes en nuestras muestras. Se usa un Lisado de Amebocitos de Limulus (LAL)

obtenidos a partir de extractos de amebocitos circulantes del cangrejo herradura

preparado y caracterizado para ser utilizado como Reactivo LAL. (2)

Pirógeno: cualquier sustancia que produce elevación dela temperatura al ser

administrado parenteralmente a humanos o animales.

Endotoxina: sustancia tóxica localizada en la pared celular de las bacterias gram

negativas.

Los niveles de endotoxina pueden reducirse controlando la introducción de

microorganismos y proliferación del sistema


20

2.4.3.2 MÉTODO DE GELIFICACIÓN

Nos proporciona una estimación de la concentración de endotoxinas bacterianas en

productos. Por lo cual se requiere de establecer una curva estándar de regresión y la

cantidad de endotoxina del material de prueba es determinada por la interpolación en la

curva de calibración mediante el use del Lisado de Amebocitos de Limulus (LAL)

Las técnicas de coagulación detectan o cuantifican las endotoxinas basándose en la

coagulación del reactivo LAL en presencia de la endotoxina. La concentración de

endotoxina necesaria para que el lisado se aglutine en condiciones estándar, es la

sensibilidad declarada en la etiqueta del Reactivo LAL. (2)

Tabla 4. Comparación del Método de Gelificación (LAL) Vs Pirógenos (conejo).

Método de Gelificación (LAL) Pirógenos (conejo)

Rápido (60min) Tarda (180min)

Mayor sensibilidad Pone de manifiesto pirógenos que no son endotoxinas

Menor cantidad de falsos positivos Mayor numero de falsos positivos

Más económico Alto costo


21

2.3 JUSTIFICACIÓN

Los productos farmacéuticos terminados, deben ser sometidos a un análisis

microbiológico que demuestre que cumplen con ciertas especificaciones establecidas

por los organismos oficiales, para garantizar que los productos son adecuados para el

uso al que están destinados.


22

2.1 OBJETIVO GENERAL:

Evaluar la calidad sanitaria de los productos farmacéuticos (materia prima,

producto intermedio, producto terminado), mediante el recuento de

microorganismos mesófilos aerobios, hongos y levaduras; así como, la

investigación de microorganismos objetables en dichos productos.

2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

Estimar el número de microorganismos viables presentes en diversas formas

farmacéuticas.

Confirmar el periodo de estabilidad de los productos farmacéuticos durante el

cual puede utilizarse de forma segura y confiable


23

2.5 METODOLOGÍA

Recuento de Microorganismos Mesofílicos Aerobios

Método en placa para identificación de OMA:

Pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL de muestra y transferir a 90 mL del

diluyente seleccionado, inocular por duplicado 1.0 mL de cada dilución del producto en

cajas petri estériles, añadir a cada caja de 15 mL a 20 mL del medio Agar Soya

Tripticaseína, con movimientos rotatorios suaves, mezclar la alícuota de la muestra con

el medio de cultivo, permitir que el medio solidifique e incubar las placas en posición

invertida entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas, pasado el tiempo de incubación tomar

lecturas y registrar en bitácora. (Grafico 1)

Después del periodo de incubación, determinar la UFC de la placa 1 (UFC1) y la

placa 2 (UFC2). Calcular el promedio de las UFC de las dos placas.

Anotar el promedio de colonias por la dilución de trabajo, informar el número de

unidades formadoras de colonia por gramo (UFC/g) del producto considerando el factor

de dilución de la muestra. Si las placas no presentan colonias informar: menor de 10 o

si no se utiliza dilución informar como cero UFC por gramo de producto (UFC/g). (2)(6)(7)

Material

Pipetas graduadas de 5 mL y 10 mL

Espátula estéril.

Cajas petri estériles desechables de vidrio.

Balanza granataria.

Cofía

Cubrebocas

Buffer de Fosfatos pH 7.2 ± 0.1 estéril

Agar Soya Tripticaseína

Inactivante (depende del producto)


24

1 mL

1 mL

Grafico 1. Método en placa para identificación de OMA

10 g o 10 mL de muestra y 90 mL del diluyente.

15 mL a 20 mL de Agar Soya Tripticaseína

Incubar las placas en posición invertida entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas.


25

Recuento de hongos filamentosos y levaduras

Pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL de muestra y transferir a 90 mL del

diluyente seleccionado, inocular por duplicado 1.0 mL de cada dilución del producto en

cajas petri estériles, añadir a cada caja de 15 mL a 20 mL del medio Agar Dextrosa

Sabouraud, con movimientos rotatorios suaves, mezclar la alícuota de la muestra con el

medio de cultivo, permitir que el medio solidifique e incubar las placas en posición

invertida entre 20 – 25 °C de 5 a 7 días, pasado el tiempo de incubación tomar lecturas

y registrar en bitácora. (Grafico 2)

Después del periodo de incubación, determinar la UFC de la placa 1 (UFC1) y la

placa 2 (UFC2). Calcular el promedio de las UFC de las dos placas.

Anotar el promedio de colonias por dilución de trabajo, informar el número de

unidades formadoras de colonia por gramo (UFC/g) del producto considerando el factor

de dilución de la muestra. Si las placas no presentan colonias informar: menos de 10

UFC por gramo de producto (UFC/g). (2)(7)(8)

Material


Espátula estéril.


Balanza granataria.

Cofía

Cubrebocas

Buffer de Fosfatos pH 7.2 ± 0.1 estéril

Agar Dextrosa Sabouraud



26

1 mL

1 mL

Grafico 2. Recuento de hongos filamentosos y levaduras

10 g o 10 mL de muestra y 90 mL del diluyente.

15 mL a 20 mL de Agar Dextrosa Sabouraud

Incubar las placas en posición invertida entre 20 – 25 °C de 5 a 7 días.


27

Investigación de microorganismos objetables

Investigación de Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus Pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL de muestra y transferir a 90 mL caldo soya

tripticaseína, mezclar e incubar, si no hay crecimiento, la muestra cumple con los

requisitos, si se observa crecimiento resembrar la muestra en medios selectivos: (2)(7)(11)

Pseudomonas aeruginosa en Agar cetrimida.

Staphylococcus aureus en el medio Agar Baird-Parker o Agar Vogel Johnson.

Si se observa crecimiento comparar la morfología colonial y microscópica. (Grafico 3)

Material


Espátula estéril.


Balanza granataria.

Cofía

Cubrebocas

Caldo Soya Tripticaseína

Agar Cetrimida

Agar Vogel-Johnson

Agar Baird-Parker



28

Grafico 3. Investigación de Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus

Si no hay crecimiento, la muestra cumple

con los requisitos de calidad sanitarios.

Pseudomonas aeruginosa

10 g o 10 mL de muestra en 90 mL caldo soya tripticaseína.

Mezclar e incubar

Si se observa crecimiento resembrar la muestra en medios selectivos

Agar Baird-Parker o Agar Vogel Johnson.

Agar cetrimida.


Incubar las placas en posición invertida entre 30 – 35 °C 24h. Si se observa crecimiento comparar la morfología colonial y microscópica.


29

Investigación de Escherichia coli y Salmonella sp

Pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL de muestra y transferir a 90 mL caldo lactosa, e incubar entre 30 – 35 ºC de 18hh a 24 h, si se presenta crecimiento resembrar 1 mL de la dilución a los siguientes medios de enriquecimiento: (2)(7)(10)

Salmonella sp, resembrar caldo selenito-cisteína y tetrationato, mezclar e incubar

de 12 a 24 h a 30 – 35 ºC, tomar una asada de cada uno de lo medios de cultivo

anteriores y resembrar por estría cruzada en los medios: AVB, XLD, ASB, e

incubar.

Escherichia coli, apartir del medio de caldo lactosa, tomar una asada y aislar

resembrando por estría cruzada en Agar Mac Conkey, incubar

Si se observa crecimiento comparar la morfología colonial y microscópica. (Grafico 4)

Material


Espátula estéril.


Balanza granataria.

Cofía

Cubrebocas

Caldo Soya Tripticaseína

Caldo Lactosado

Caldo Tetrationato

Caldo Selenito Cistina

Agar Verde Brillante (AVB)

Agar Sulfito Bismuto (ASB)

Agar Xilosa-Lisina-Desoxicolato (XLD)

Agar MacConkey



30

Salmonella sp,

Escherichia coli

Grafico 4. Investigación de Escherichia coli y Salmonella sp

10 g o 10 mL de muestra en 90 mL caldo lactosa

Si no hay crecimiento, la muestra cumple

con los requisitos.

Mezclar e incubar

Si se observa crecimiento resembrar la muestra en medios selectivos

Caldo selenito-cisteína y caldo tetrationato

Agar Mac Conkey, incubar

Medios AVB, XLD, ASB.

Incubar de 30 – 35 °C 24 h. Si se observa crecimiento comparar la morfología colonial y microscópica.


31

Análisis de Agua

Recolectar la muestra. Identificar las muestras (sitio, clave y fecha), realizar los análisis

utilizando material y medios esterilizados y bajo condiciones de esterilidad, colocar la

membrana en la base del filtro, asegurarse de cerrar bien el embudo, colocar 100 mL

para filtrar, tomar la membrana y como colocarla en una placa con el medio de cultivo,

incubar las placas en posición invertida entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas, pasado

el tiempo de incubación tomar lecturas y registrar en bitácora. (Grafico 5)

Dependiendo del tipo de agua se le realizara el respectivo análisis:

Agua potable: Cuenta de organismos mesofilos aerobios, coliformes totales y

coliformes facales

Agua purificada: Cuenta de organismos mesofilos aerobios

Agua para inyectables: Cuenta de organismos mesofilos aerobios

Material

Pipetas graduadas de 1 mL

Cajas petri estériles desechables.

Cofía

Cubrebocas

Equipo de filtración estéril

Embudos para filtración esteriles

Agar EMB

Agar Soya Tripticaseína

Membrana para filtración

Reactivo de Lal

Baño a 37 °C 1


32

Grafico 5. Análisis de Aguas Filtración al vacío

Muestra de agua

.


.

EMB para coliformes totales y E. coli

.

AST para OMAs

.

Incubar las placas en posición invertida

entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas.

Pasado el tiempo de incubación tomar

lecturas y registrar en bitácora.


33

ENDOTOXINA

La prueba de LAL por el método gel-clot se realizó adicionando 0,1 mL del reactivo de

LAL de sensitividad = 0,25 UE/mL con 0,1 mL de la muestra. El tubo se agitó suave

pero completamente, se incubó en un baño de agua no circulante a 37 ± 1 ºC por 60 ± 2

min. Al final de este periodo de incubación, se retiró el tubo del baño y se invirtió en un

ángulo de 180 ºC para realizar la lectura.

Positivo: coagulación

Negativo: no coagula

El resultado deberá registrarse como < 0.25


34

3.- RESULTADOS

Tabla 5. Resultado de los productos analizados de Febrero a Septiembre 2008

Tabletas


A PT001 Mic Mesfílicos Aerobios Max 100 UFC/ g 1:10 <10


B PT002

Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10



C PT003





D PT004





Soluciones orales

E PT005

Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL 1:10 <10

Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL 1:10 <10



F PT006 Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL 1:10 <10


G PT007

Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL Dir <10

Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL Dir <10

E. coli Ausentes Dir Ausente

Polvos para suspensiones orales

H PT008

Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL Dir <10



I PT009 Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL Dir <10


Jarabes

J PT010 Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL 1:10 <10


Tabletas vaginales

K PT011

Mic Mesofílicos Aerobios Max 500 UFC/g 1:10 <10


S. aureus Ausentes 1:10 Ausente

Pseudomonas Ausentes 1:10 Ausente


35

Tabla 6. Resultado de materia prima analizada de Febrero a Septiembre 2008


A MP011



E. coli Ausentes/10 g 1:10 Ausente

Salmonella Ausentes/10 g 1:10 Ausente

S. aureus Ausentes/10 g 1:10 Ausente

Pseudomonas Ausentes/10 g 1:10 Ausente

B MP012


E. coli Ausente 1:10 Ausente

Salmonella Ausente 1:10 Ausente

Pseudomonas Ausente 1:10 Ausente

C MP013 Mic Mesofílicos Aerobios Max 25000 UFC/ g 1:10 <10


D MP014




E MP015 Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10


F MP016




G MP017





H MP018


S. aureus Ausentes/10 g 1:10 Ausente


I MP019 Mic Mesofílicos Aerobios Max 25000 UFC/ g 1:10 <10


J MP020




Salmonella Ausentes/10 g 1:10 Ausente


36

Tabla 7. Resultado de las estabilidades analizadas de Febrero a Septiembre 2008

Producto Lote Condiciones Análisis Especificaciones Dilución Resultado

A PT001 12 m, 25 °C, 60 ٪ HR

Mic Mesofílicos Aerobios

Max 100 UFC/ g 1:10 <10

Hongos y levaduras

Max 10 UFC/ g 1:10 <10

E PT005 12 m, 25 °C, 60 ٪ HR


Max 100 UFC/mL 1:10 <10

Hongos y levaduras

Max 10 UFC/mL 1:10 <10



S. aureus Ausentes 1:10 Ausente

F PT006 12 m, 25 °C, 60 ٪ HR


Max 100 UFC/mL 1:10 <10

Hongos y levaduras

Max 10 UFC/mL 1:10 <10

H PT008 24 m, 30 °C, 65 ٪ HR


Max 100 UFC/mL Dir <10

Hongos y levaduras



I PT009 36 m, 25 °C, 60 ٪ HR



Hongos y levaduras



37

Tabla 8. Resultado de los tipos de agua analizadas de Febrero a Septiembre 2008

Agua potable

No. Resultados de OMA (UFC/mL)

Resultados de coliformes totales (UFC/100 mL)

Resultados de coliformes fecales (UFC/100 mL)

1 3 0 0

2 5 0 0

3 0 0 0

4 1 0 0

5 0 0 0

6 0 0 0

7 2 0 0

8 0 0 0

9 0 0 0

10 0 0 0

11 0 0 0

12 0 0 0

Agua purificada


13 0

14 0

15 0

16 0

17 0

18 0

19 0

20 0

21 0

22 0

Agua para uso inyectable


Endotoxina UE/mL

23 0 < 0.25

24 0 < 0.25

25 0 < 0.25

26 0 < 0.25


38

3.1 ANÁLISIS DE RESULTADOS

Producto terminado

En la tabla No. 4 aparece el conteo total de microorganismos presentes en cada uno de

los lotes analizados, además del análisis de microorganismos patógenos objetables los

cuales deben de cumplir con los límites establecidos

El conteo total de microorganismos mesófilos aerobios, así como el de hongos y

levaduras se realiza en general para todos los productos no estériles ya que cuando el

consumidor adquiere el producto espera que éste se encuentre en perfectas

condiciones, en muchos procesos industriales las contaminaciones microbianas afectan

la producción (aire, superficies, equipos, personal, materias primas, envase y empaque)

afectando la calidad del producto; el recuento varía de acuerdo a los limites

establecidos para cada producto.

Producto A

Es un producto de administración oral sólida, las especificaciones nos indican que

además de la investigación microorganismos mesófilos aerobios, hongos y levaduras, el

cual demostró estar dentro de los límites, se realizó el estudio de estabilidad para este

mismo considerando el tiempo cero y a 12 meses, a pesar de las condiciones de

temperatura y humedad, este producto demostró ser inocuo para su consumo sin

causar ningún daño en el organismo.

Producto B

Es una forma farmacéutica sólida de administración oral, este producto se utiliza para

tratar la alta presión sanguínea así que es importante realizar la investigación de

microorganismos objetables.

E. coli : tiene que resultar ausente en el producto, ya que su presencia puede causar

una diarrea hemorrágica y a veces puede causar insuficiencia renal y hasta la muerte,

además de infecciones intestinales y extra-intestinales generalmente severas, tales


39

como infecciones del aparato excretor, meningitis, peritonitis, mastitis, septicemia y

neumonía Gram-negativa.

Producto C

Este producto está indicado para el tratamiento de la hipertensión, por lo cual es

importante el análisis de microorganismos patógenos.

Para el caso de E. coli el resultado durante el periodo de análisis como se puede

observar en la tabla 4 se mantuvo ausente demostrando estar dentro de las

especificaciones.

Salmonella: tiene que resultar ausente en el producto; la enterocolitis por Salmonella es

uno de los tipos más comunes de intoxicación por productos farmacéuticos y ocurre

cuando se consume productos contaminados con la bacteria Salmonella. Cualquier

producto se puede contaminar durante la producción por el personal que lo manipula;

su presencia puede causar salmonelosis, diarrea y dolor abdominal.

Producto D

Es un antipsicótico atípico. Se utiliza para tratar la esquizofrenia y el trastorno bipolar,

también conocido como maníaco-depresión. Este producto se puede utilizar en

combinación con antidepresivos para tratar el trastorno depresivo mayor y por ser una

forma farmacéutica de administración oral, a este producto es necesario realizar el

análisis de E. coli y Salmonella ya que como ya se mencionó, la presencia de éstos

pueden afectar severamente al consumidor.

Producto E

Para este producto E. coli y Salmonella durante el período de análisis cumplen con los

limites de especificación, además de que el principio activo mantiene sus características

a pesar de ser sometido a ciertas condiciones de estabilidad, y como se muestra en la

tabla 6 los análisis realizados resultaron favorables para que el producto sea utilizado

bajo las condiciones establecidas.


40

Producto F

Para este producto las especificaciones marcan el análisis de microorganismos

mesofilos aerobios, hongos y levaduras, así como la prueba de estabilidad bajo las

condiciones y como se observa esta dentro de los limites establecidos

Producto G

Se administra de forma oral, y se analiza de forma directa, su indicación es en los

pacientes con hepatitis B crónica, por lo cual es de suma importancia el análisis de

microorganismos patógenos para los cuales se tiene como resultado la ausencia de E.

coli y Salmonella

Producto H e I

Estos productos son polvos para suspensiones orales se emplean para tratar

infecciones causadas por bacterias, como se muestra en la tabla 4 estos cumplen con

los limites de especificación, y en la tabla 6 los resultados nos indican que cumple con

las especificaciones de estabilidad

Producto J

Es una forma farmacéutica semisólida, la cual contiene altas concentraciones de azúcar

que ayuda a evitar la contaminación microbiológica, sin embargo es importante el

análisis del producto para tener la seguridad de que ha sido preparado bajo las

condiciones de calidad sanitaria, para el período de Febrero a Septiembre el producto

se mantuvo dentro de los limites de especificación.

Producto K

Pertenece al grupo de medicamentos llamados antifúngicos, se usa para tratar las

infecciones de la vagina por hongos, en la tabla de resultados las especificaciones no

indican el análisis de microorganismos patógenos.

Staphyloccus aureus: el crecimiento de este microorganismo en los productos es

acompañado por la producción de algunos compuestos extracelulares como


41

enterotoxinas, las cuales pueden causar intoxicaciones al consumir el producto, esta

intoxicación no es considerada como enfermedad grave, sin embargo, se han llegado a

presentar algunas muertes en ancianos y niños, por lo tanto el resultado de

Staphyloccus aureus es Ausente.

Pseudomonas: es un patógeno oportunista en humanos, infectando el tracto urinario, el

resultado es Ausente.

El conteo total de microorganismos mesófilos aerobios se mantienen dentro de los

límites establecidos para cada uno de los productos y los resultados de

microorganismos objetables durante el período de Febrero a Septiembre fueron

ausentes

Materia prima

Como se indica en la metodología para la MP es importante la investigación de

microorganismos patógenos objetables (Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas

aeruginosa y Staphylococcus aureus), debido a que la materia prima constituye una de

las principales fuentes de contaminación, ya que si ésta contiene microorganismos

pueden contaminar el producto del cual forman parte.

Como se muestra en la tabla 5 muestra los resultados de la materia prima mas utilizada

en el periodo de Febrero a Saptiembre demostrando que cumple con los límites

establecidos, proporcionando la seguridad de que ésta puede ser utilizada para la

producción de los productos farmacéuticos que así lo requieran.

Análisis de agua

El agua es la principal materia prima dentro de la industria farmacéutica por lo cual se

debe de monitorear diariamente para asegurar su calidad sanitaria, dependiendo del

tipo de agua se tiene que analizar las pruebas indicadas:


42

Agua potable: durante el periodo de Febrero a Septiembre se tiene un máximo de

organismos mesófilos aerobios de 3 UFC/mL, y lo cual nos indica que cumple con

los límites, ya que como se indica en la tabla No. 3 este tipo de agua se considera

un limite <500 UC/mL,

Agua purificada: la tabla 3 indica un límite de <100 UFC/mL para lo cual se

observa en los resultados que se encuentra dentro de los limites de

especificación.

Para inyectables: se tiene un limite de <10 UFC/mL, para la cual durante el

periodo de Febrero a Septiembre resultados indicados en la tabla No. 8 nos

indican cumple con las especificaciones; en cuanto al análisis de endotoxina se

mantiene < 0.25 UE/mL indicando que cumple con el grado inyectable para

usarse en la fabricación de los productos inyectables.


43

4. Conclusiones

De acuerdo con los resultados obtenidos en los productos analizados se percibe

que el sistema de calidad manejado en Bristol Myers Squibb es robusto por el

cumplimiento que se tiene hacia las Buenas Prácticas de Manufacturas, Buenas

Prácticas de Laboratorio y Buenas Prácticas de Documentación.

En la fabricación de los diferentes productos se debe de tener en cuenta muchos

aspectos críticos para mantener un control microbiológico y uno de ellos es la

revisión del contenido microbiano para los diferentes productos.

Se llevo acabo el control microbiológico de los productos farmacéuticos no

estériles, manejando correctamente las técnicas adecuadas descritas en las

metodologías oficiales.

Los microorganismos que contaminan a los productos farmacéuticos pueden

llegar al producto durante el proceso de producción a través de la materia prima,

el ambiente de producción, el equipo, el material primario y el personal que

trabaja directamente en el proceso.

En base a los resultados obtenidos se muestra que el contenido de carga

microbiana no sobrepasa los limites establecidos, por lo que el proceso esta

controlado.

Los estudios de estabilidad resultan una herramienta importante para garantizar

la calidad, seguridad y eficacia de los productos farmacéuticos demostrando que

el producto es apto durante un periodo de tiempo determinado.

Una fuente de contaminación interna en la industria farmacéutica es el sistema

de distribución de agua, sin embargo el análisis continuo de la misma nos

proporciona información suficiente para controlar la calidad microbiológica.


44

5.- GLOSARIO.

Microorganismos viables: Organismos microscópicos como bacterias y hongos con

capacidad de reproducción y dan lugar a la formación de colonias. Prueba de esterilidad: Determinación de la ausencia de microorganismos viables en la

muestra. Prueba de límite microbiano: Es el recuento de los microorganismos viables

presentes en una muestra no estéril, para determinar si se encuentra dentro de los límites establecidos. Prueba de promoción del crecimiento: Determina la capacidad del medio de cultivo para permitir el crecimiento de determinados microorganismos viables. Estabilidad. Es la capacidad de un fármaco o un medicamento de permanecer dentro

de las especificaciones de calidad establecidas, en el envase que lo contiene durante su periodo de vida útil. Estudios de estabilidad. Pruebas que se efectúan a un fármaco o a un medicamento por un tiempo determinado, bajo la influencia de temperatura, humedad o luz en el envase que lo contiene. Estudios de estabilidad acelerada. Estudios diseñados bajo condiciones exageradas

de almacenamiento para incrementar la velocidad de degradación química, biológica o los cambios físicos de un fármaco o de un medicamento. Estudios de estabilidad a largo plazo. Estudios diseñados bajo condiciones de almacenamiento controladas para evaluar las características físicas, químicas, biológicas o microbiológicas del fármaco o del medicamento durante el periodo de reanálisis o de caducidad, respectivamente. Fármaco. Toda sustancia natural, sintética o biotecnológica que tenga alguna actividad farmacológica y que se identifique por sus propiedades físicas, químicas o acciones biológicas, que no se presente en forma farmacéutica y que reúna condiciones para ser empleada como medicamento o ingrediente de un medicamento. Forma Farmacéutica. Es la mezcla de uno o más fármacos con o sin aditivos, que permita su administración. Calidad sanitaria: Asegura productos aptos e “inocuos” para el consumo humano. La inocuidad se aplica a productos alimenticios, cosméticos y farmacéuticos, los cuales deben cumplir con sus funciones específicas para los cuales fueron creados, libres de contaminación de cualquier tipo.


45

6.- Anexos

ANEXO 1

“Microorganismos patógenos”

Salmonella: es un bacilo Gram negativo que se comporta como patógeno intracelular

facultativo. Su hábitat es el aparato gastrointestinal de los animales y el hombre, nunca

como microbiota normal. Se encuentra asociada a problemas gastrointestinales,

septicémicos y aborto gracias a su capacidad de invasión celular y sobrevivencia

intrafagocítica.

Escherichia coli: es uno de los muchos grupos de bacterias que viven en los intestinos

de los humanos sanos y en la mayoría de los animales de sangre caliente. Esta

bacteria ayuda a mantener el equilibrio de la flora intestinal normal (flora bacteriana)

contra las bacterias nocivas y sintetiza o produce algunas vitaminas.

Staphylococcus aureus, un microorganismo patógeno presente en piel de animales y

personas, además de en sus fosas nasales y gargantas. Es un microorganismo muy

resistente a las condiciones ambientales y extremadamente difíciles de erradicar. Pese

a que no es esporulado (formas de resistencia elaboradas de forma natural por algunos

microorganismos), soporta bien condiciones extremas aunque se inactiva a temperatura

de congelación

Pseudomona sp: es un bacilo gram negativo, oxidasa positivo, aeróbico estricto

aunque en algunos casos pueden utilizar el nitrato como aceptor de electrones. móvil,

que pertenece a la familia Pseudomonadaceae. Es relativamente ubicua y comúnmente

se la encuentra en el polvo, el agua, las plantas y verduras, medio ambiente marino y

animales.

Puede crecer bien en diferentes medios y soporta gran variedad de condiciones físicas.

Si bien su predilección son los ambientes húmedos la P. aeruginosa es primariamente

un patógeno hospitalario y causa enfermedad en forma frecuente a huéspedes

normales.


46

ANEXO 2 “Características de medios de cultivos”

Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus

constituyentes en:

Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen

animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición de

minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes ni

las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.

Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición

química definida cualitativamente y cuantitativamente. Generalmente se usan en

trabajos de investigación.

De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:

Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento de

un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número de

microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustancias

inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los que se

quieren cultivar.

Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser

medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos

específicos.

Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos

derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen

ningún tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar

características fisiológicas de los microorganismos.

Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:

Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o

proveedores que suministren productos de calidad.

Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y

fisicoquímica adecuada.

Utilizar materiales de vidrio bien lavado y enjuagado con agua destilada o

desmineralizada.

Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización.


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Nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante.

Agar Baird Parker: Medio de alta especificidad diagnóstica, selectivo y diferencial para

el aislamiento y recuento de estafilococos coagulasa positiva en materiales de

importancia sanitaria.

En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el extracto de carne

constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el extracto de levadura aporta vitaminas

del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos.

Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de potasio y al cloruro

de litio, los cuales inhiben el desarrollo de la flora acompañante. La yema de huevo

permite demostrar la actividad lecitinásica.

Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de

color grisáceo-negro, y dan reacción sobre la yema de huevo produciendo alrededor de

la colonia una zona opaca que a menudo tiene una zona clara mas externa.

Se pueden encontrar cepas no lipolíticas, que presentan igual características de

colonias pero sin la zona opaca y clara.

Agar Cetrimida: Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas

aeruginosa y de otras especies del género.

La fórmula de este medio está desarrollada para favorecer la selección de P.

aeruginosa y estimular la formación de pigmentos. Es éste un medio muy semejante al

King A, en el cual el cloruro de magnesio y el sulfato de potasio promueven la formación

de piocianina, pioverdina y piomelanina de P. aeruginosa. La cetrimida es un detergente

catiónico que actúa como agente inhibidor, libera el nitrógeno y el fósforo de las células

de casi toda la flora acompañante, aunque inhibe también algunas especies de

Pseudomonas.

Agar Sabouraud: Medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de

hongos patógenos y saprófitos. También es útil para el cultivo de levaduras.


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Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos,

particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel, pelo, etc.). En el medio de

cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para el desarrollo de

microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH

ácido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. Además, al medio

de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento.

Agar Mac Conkey: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos

de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que

utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de

la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el

desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de

sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de

gran parte de la flora Gram positiva.

Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce

un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la

precipitación de las sales biliares.

Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Agar Sulfito de Bismuto: El medio de cultivo agar sulfito de bismuto, es un medio

selectivo recomendado para el aislamiento y diferenciación de Salmonella typhi y otras

Salmonellas a partir de diversas muestras.

La presencia de sulfito de bismuto inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y

de la mayoría de las bacterias Gram negativas. La producción de sulfuro de hidrógeno

se manifiesta en el centro de la colonia por un precipitado negro y un halo negro


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grisáceo con brillo metálico por la reacción de los iones bismuto con el sulfuro de

hidrogeno

Agar Soya Tripticaseína: es un medio utilizado para promover el crecimiento de

microorganismos fastidiosos y adicionado de sangre para observa reacciones

hemolíticas.

Verde Brillante Agar: Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento

de Salmonella spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a partir de muestras clínicas,

alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria. No se recomienda para el

aislamiento de Shigella spp.

Es de un valor excepcional cuando se investiga un gran número de muestras de heces

o alimentos, por su alta capacidad de diferenciación de las colonias sospechosas.

En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente

de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de

carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando

hay producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, el cloruro de sodio

mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo.

Agar Vogel Johnson: Medio utilizado para la rápida detección de estafilococos

coagulasa positivo fermentadores de manitol, a partir de alimentos y otros materiales de

importancia sanitaria y clínica. En el medio de cultivo, la tripteína y el extracto de

levadura, aportan los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. El

manitol es el hidrato de carbono fermentable. El telurito, el cloruro de litio y la alta

concentración de glicina, son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de la flora

acompañante y el rojo fenol es el indicador de pH.

Los estafilococos coagulasa positivo, fermentan el manitol, produciendo la acidificación

del medio y el viraje del indicador de pH al color amarillo, y también reducen el telurito a

teluro. Debido a esto, se observan como colonias de color negro, rodeadas de una zona

amarilla.


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Lactosado Caldo: Se recomienda como prueba presuntiva para investigar la presencia

de bacterias del grupo coliforme en agua, productos lácteos, etc.

Actualmente también está indicado para el preenriquecimiento no selectivo en la

búsqueda de Salmonella sp.

Es un medio rico en nutrientes,y no contiene inhibidores del crecimiento bacteriano.

El extracto de carne y la peptona, son la fuente de carbono y nitrógeno, mientras que la

lactosa es el hidrato de carbono. Por la fermentación de la lactosa, se produce ácido y

gas, y éste último se demuestra al usar las campanas Durham.

Se le usa también como medio de preenriquecimiento, porque permite recuperar células

injuriadas, diluye sustancias tóxicas o inhibitorias y favorece el desarrollo de Salmonella

con respecto a otras bacterias

Caldo Selenito Cistina: Medio utilizado para el enriquecimiento selectivo de

Salmonella sp. a partir de muestras de materiales de importancia sanitaria.

En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el selenito de sodio inhibe

flora Gram positiva y la mayoría de la flora entérica excepto Salmonella sp. La l-cistina

es el agente reductor y fue propuesta por la FDA para el aislamiento de Salmonella en

productos alimenticios incrementando la recuperación por reducción de la toxicidad del

selenito.

Caldo Digerido de Caseína-Soya-Polisorbato 20: Medio de dilución, recomendado

por USP para realizar el control higiénico de productos no obligatoriamente estériles.

Este medio de dilución, tiene la capacidad para neutralizar desinfectantes, debido a la

presencia de lecitina de soja, que neutraliza compuestos de amonio cuaternario.

El agregado de polisorbato 20 (tween 20), es útil para neutralizar compuestos tales


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como fenol, formalina, hexaclorofeno, y la combinación de la lecitina con el Tween,

permiten neutralizar etanol.

Caldo Tetrationato: Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de

Salmonella spp. a partir de materiales de importancia sanitaria

El medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios para el

desarrollo bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y absorbe metabolitos

tóxicos. La selectividad está dada por la presencia de tiosulfato de sodio, tetrationato

(generado en el medio por el agregado de la solución iodo-iodurada) y sales biliares, los

cuales permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato

reductasa, como ser la Salmonella spp. e inhiben el desarrollo de la flora acompañante.

Medio Levine (eosina azul de metileno): Sus componentes fundamentales son la

eosina y el azul de metileno. Se utiliza para diferenciar las enterobacterias coliformes

(lactosa +) y las no coliformes (lactosa – colonias transparentes Salmonella y Shigella)

Medio Agar XLD (agar xilosa, lisina.dexicolato): Los compuestos principales son la L-

lisina, el rojo fenol, el tiosulfato sódico, el citrato de hierro y azúcares (lactosa, glucosa y

xilosa). Sirve para aislar enterobacterias patógenas. Para hacer la lectura hay que

seguir los siguientes criterios:

La descarboxilación de la lisina: colonias rojas característico de Shigella

Fermentación de azúcares: Colonias amarillas tipos de Escherichia, Citrobacter,

Serratia, Proteus, Enterobacter y Kelbsiela.

Producción de SH2 (debido a tiosulfato sódico y citrato férrico): colonias negras

típico en Salmonella SH2 +, Arizona, Proteus y Edwardsiella.


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ANEXO 3

“Tablas de características para la identificación de microorganismos patógenos”

Tabla 9. Características morfológicas de Staphylococcus aureus sobre medios de cultivos

selectivos-diferenciales.

Medio de cultivo Morfología colonial Morfología microscópica y

reacción al Gram Imagen

Agar Vogel Johnson Colonias negras rodeadas de zona amarilla

Cocos Gram positivos agrupados en racimos.

Agar Baird Parrker

Colonias negras lustrosas brillantes rodeadas de sonas claras de 2 a 5 mm

Cocos Gram positivos agrupados en racimos.

Tabla 10. Características morfológicas de Pseudomonas aeruginosa sobre medios de cultivos


Medio de cultivo Morfología colonial Morfología microscópica y

reacción al Gram Imagen

Agar Cetrimida Colonias verdosas Bacilos Gram negativos


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Tabla 11. Características morfológicas de Salmonella sp sobre medios de cultivos


Medio de cultivo Morfología colonial Morfología microscópica

y reacción al Gram Imagen

Agar Verde Brillante

Colonias pequeñas transparentes incoloras rosas o blancas opacas, frecuente mente rodeadas de una zona rosa o roja

Bacilos Gram negativos

Agar xilosa-lisina desoxicolato

Colonias rojas con o sin centro roja


Agar sulfito de bismuto

Colonias negras o verdes


Tabla 12. Características morfológicas de Escherichia coli sobre medios de cultivos


Medio de cultivo Morfología colonial Morfología microscópica

y reacción al Gram Imagen

Agar Mac Conkey Colonias grandes rosas a rojas rodeadas de una zona de precipitado



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ANEXO 4

“Microorganismos en el Análisis de Agua”

Tabla 13. Características medios de cultivos para el análisis de agua.

Tipo de Agua Método Medio de cultivo Imagen

Agua potable

Vaciado en placa Agar Soya Tripticaseina


Agar EMB

Agua purificada Filtración por membrana

Agar Soya Tripticaseina

Agua para inyectables


Agar Soya Tripticaseina


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7.- RECOMENDACIONES PARA ESTANCIAS FUTURAS

Para los alumnos que desean conocer o laborar en la Industria, es importante la

realización de la estancia ya que esta le reportara grandes beneficios

Es importante que consideres la estancia industrial como una manera de seguir

aprendiendo, aplicando conocimientos y habilidades.

El mantener un comportamiento adecuado y con el mayor desempeño posible

dentro de la empresa puede beneficiarte en un futuro, ya que puede abrirte

oportunidades de trabajo.

A medida que el alumno adquiere conocimientos es necesario que los practique,

bajo la supervisión de los profesionales del área de trabajo.

Debe ser capaz de tomar decisiones apropiadas en el momento preciso, creer en

el mismo y en sus conocimientos, a demás de buscar la superación personal y

profesional a prendiendo y aportando conocimientos.


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8. REFERENCIAS:

6. Farmacopea de los Estados Unidos de América; Formulario Nacional; Vol. 1; Edición anual en español (USP)

7. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; octava edición; Vol. I 2004; México (FEUM)

8. http://www.bristol.com.mx 9. NOM-059-SSA1-1993 Buenas practicas de fabricación 10. NOM-073-SSA1-2005 Estabilidad de Fármacos y Medicamentos 11. NOM-092-SSA1-1994 Método para la Cuenta de Bacterias Aerobias en Placa. 12. NOM-110-SSA1-1994 Preparación y dilución de muestras de alimentos para su

análisis microbiológico. 13. NOM-111-ssa1-1994, Bienes y Servicios. Método para la cuenta de mohos y

levaduras en alimentos. 14. NOM-113-SSA1-1994, Bienes y Servicios. Método para la cuenta de

microorganismos coliformes totales en placa. 15. Nom-114-SSA1-1994, Bienes y Servicios. “Método para la determinación de

Salmonella en alimentos”. 16. NOM-115-Ssa1-1994, Bienes y Servicios. Método para la determinación de

Staphylococcus aureus en alimentos. 17. NOM-127-SSA1-1994, "Salud Ambiental, Agua para uso y consumo Humano-

Limites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilización".

18. NOM-180-ssa1-1998, Salud ambiental. Agua para uso y consumo humano. Equipos de tratamiento de tipo doméstico. Requisitos sanitarios.

19. Jean F. Mac Faddin Pruebas Bioquímicas para Identificación de Bacterias de Importancia Clínica, , 3ª edición, Editorial Medica Panamericana

ingeniero farmacÉutico

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